IGF-1通過下調(diào)BETB表達(dá)改善線粒體功能保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡.pdf

1、目的:
　　心肌細(xì)胞凋亡是心血管疾病發(fā)生和發(fā)展的重要原因，胰島素樣生長(zhǎng)因子1（Insulin-like growth factors1，IGF-1）可以保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡。在我們的前期工作中，利用基因芯片技術(shù)，篩選出受IGF-1調(diào)控下調(diào)、而未見報(bào)道與心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因----基本轉(zhuǎn)錄元件結(jié)合蛋白(Basic transcription element bindingprotein，BTEB)。BTEB是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，主要調(diào)控

2、能量代謝相關(guān)基因細(xì)胞色素c家族成員的基因表達(dá)，因而我們推測(cè)，線粒體與氧化應(yīng)激機(jī)制可能參與了心肌細(xì)胞凋亡的過程。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察IGF-1通過下調(diào)BTEB表達(dá)對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞線粒體功能的保護(hù)作用，從而為明確IGF-1保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡的精確機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)乳鼠原代心肌細(xì)胞，血清饑餓和過氧化氫(200μM)誘導(dǎo)凋亡，并用IGF-1(10 nM)刺激處理，通過Annexin V-FITC/PI雙染色法、半胱天

3、冬蛋白酶-3(Caspase-3)酶活性檢測(cè)，觀察IGF-1對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。并進(jìn)一步利用siRNA技術(shù)下調(diào)BTEB基因表達(dá)，用JC-1線粒體膜電位檢測(cè)法、透射電鏡觀察被誘導(dǎo)凋亡的心肌細(xì)胞線粒體膜電位和形態(tài)的改變，用DNA-Ladder、AnnexinV-FITC/PI雙染色法、Hoechst33258、Caspase-3等檢測(cè)方法觀察心肌細(xì)胞凋亡的改善情況。
　　結(jié)果:
　　血清饑餓和過氧化氫可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)

4、胞凋亡，IGF-1能夠明顯改善心肌細(xì)胞凋亡的情況;siRNA人為下調(diào)BTEB48 h后，心肌細(xì)胞線粒體膜電位明顯下降率下降(P＜0.01)，線粒體形態(tài)明顯改善，DNA片段化改善，凋亡小體明顯較少，Caspase-3酶活性降低(P＜0.01)，細(xì)胞凋亡率明顯下降(P＜0.01)，與IGF-1抗心肌細(xì)胞凋亡效應(yīng)相似。
　　結(jié)論:
　　IGF-1通過下調(diào)BTEB表達(dá)改善心肌線粒體的功能，BTEB是IGF-1保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡的關(guān)