16338.irgarol1051通過破壞線粒體的結(jié)構(gòu)和功能而誘發(fā)細(xì)胞凋亡

1、IrgarolIrgarolIrgarolIrgarol1051105110511051通過破壞線粒體的結(jié)構(gòu)和功能而誘發(fā)細(xì)通過破壞線粒體的結(jié)構(gòu)和功能而誘發(fā)細(xì)胞凋亡胞凋亡作者：王麗指導(dǎo)教師：劉文華教授摘要本文通過Irgarol1051對(duì)HepG2細(xì)胞進(jìn)行處理后發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞線粒體的產(chǎn)生瞬時(shí)ROS，進(jìn)而破壞線粒體脊的結(jié)構(gòu)和其功能，使其膜電位降低，促進(jìn)線粒體釋放細(xì)胞色素C，以至細(xì)胞凋亡程序啟動(dòng)而影響細(xì)胞的正常代謝活動(dòng)，使細(xì)胞的生長受到抑制，進(jìn)而誘

2、發(fā)細(xì)胞凋亡。通過進(jìn)一步的體外線粒體暴露實(shí)驗(yàn)得出，Irgarol1051對(duì)線粒體作用的深層機(jī)制是干擾電子從細(xì)胞色素氧化酶進(jìn)行傳遞進(jìn)程，同時(shí)抑制了復(fù)合物Ⅲ的活性而最終抑制ATP的合成，而其引發(fā)的線粒體功能紊亂最終也誘導(dǎo)了細(xì)胞的死亡。同時(shí)Irgarol1051和Cu2的協(xié)同暴露實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，，而使細(xì)胞的生長受到抑制，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞凋亡；同時(shí)，HepG2細(xì)胞切片的電鏡觀察顯示，可以提高促凋亡基因BAX的表達(dá)而使細(xì)胞凋亡，同時(shí)表現(xiàn)出一定的神經(jīng)毒性。關(guān)鍵

3、詞：Irgarol1051；細(xì)胞凋亡；線粒體；BAX；細(xì)胞色素C目錄中文摘要...........................................................................................................................Ⅰ英文摘要......................................................

4、.....................................................................Ⅱ目錄...................................................................................................................................Ⅲ第一章緒論...........

5、..........................................................................................................71.1研究背景..........................................................................................................

6、....71.1.1Irgarol1051的檢測及應(yīng)用.......................................................................71.1.2Irgarol毒性研究的現(xiàn)狀..........................................................................121.2細(xì)胞凋亡...................

7、.........................................................................................131.3氧化應(yīng)激與細(xì)胞損傷.......................................................................................141.4線粒體與細(xì)胞凋亡的關(guān)系..............

8、.................................................................161.5電子傳遞鏈........................................................................................................171.6NO的神經(jīng)毒性作用...........................

9、...............................................................181.7研究目的............................................................................................................19第二章實(shí)驗(yàn)材料...............................

10、...........................................................................19第三章實(shí)驗(yàn)方法..........................................................................................................203.1Irgarol誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究..

11、....................................................203.1.1細(xì)胞活力檢測..........................................................................................203.1.2AnnexinVFITCPI雙染法.........................................

12、...........................213.1.3細(xì)胞內(nèi)ROS含量檢測...........................................................................223.1.4線粒體膜電位檢測.................................................................................223.1

13、.5細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度.................................................................................233.1.6線粒體呼吸爆發(fā).....................................................................................233.1.7Caspase3酶活力檢測..........

14、....................................................................233.1.8Caspas9活力檢測.................................................................................243.1.9細(xì)胞核DAPI熒光染色...................................

15、.......................................243.1.10細(xì)胞內(nèi)CytochromeC檢測.................................................................253.1.11細(xì)胞組織電鏡切片............................................................................

16、...253.2體外線粒體Irgarol暴露研究其對(duì)電子傳遞的影響.....................................263.2.1線粒體的提取..........................................................................................263.2.2線粒體蛋白質(zhì)定量................................

17、.................................................263.2.3線粒體完整性測定（RCR測定）.......................................................273.2.4線粒體體外ROS測定...........................................................................27

18、3.2.5線粒體體外膜電位測定.........................................................................273.2.6線粒體呼吸鏈復(fù)合物V活性測定.......................................................283.3Irgarol與Cu2對(duì)大鼠神經(jīng)細(xì)胞的協(xié)同效應(yīng)............................

19、.......................283.3.1NO熒光檢測............................................................................................283.3.2乙酰膽堿酯酶(AChE)檢測....................................................................283

20、.3.3乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）檢測..........................................................293.3.4抑制凋亡因子Bcl2和促凋亡因子BAX的測定..............................29第四章.實(shí)驗(yàn)結(jié)果..........................................................................

21、...................................294.1Irgarol誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡...........................................................................294.1.1Irgarol抑制HepG2細(xì)胞生長..............................................................