CHAC2通過(guò)非折疊蛋白反應(yīng)調(diào)控胃腸腫瘤細(xì)胞的凋亡和自噬.pdf

1、在我國(guó),消化系統(tǒng)癌癥死亡率始終排名靠前,其中胃癌和腸癌均位于前五位。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多階段、多步驟的,由多種因素(內(nèi)源性和外源性)異常累積并相互作用,尤其涉及抑癌基因的失活和原癌基因的激活。因此,探索新的腫瘤抑癌基因功能、明確其與胃腸道腫瘤惡性特征的關(guān)系,對(duì)揭示腫瘤起源及進(jìn)展的微觀分子機(jī)制、指導(dǎo)臨床早期診斷和個(gè)體化治療具有重要意義。
　　目的:CHAC2是離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)類似蛋白(Cation transport regulator-

2、like protein,CHAC)家族的成員,我們發(fā)現(xiàn)它在胃腸道腫瘤組織及多數(shù)胃腸腫瘤細(xì)胞株中表達(dá)量降低。希望更深入地探索CHAC2的生物學(xué)功能,闡明其作用于胃腸道腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程的機(jī)制。
　　方法:用RT-PCR,免疫組織化學(xué),Western Blot技術(shù)檢測(cè)CHAC2在正常人組織和胃腸腫瘤組織及胃腸癌腫瘤細(xì)胞系的表達(dá)。通過(guò)體外質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,建立穩(wěn)定表達(dá)CHAC2的胃癌和結(jié)直腸癌細(xì)胞株進(jìn)行生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn),觀察CHAC2在體外對(duì)細(xì)胞

3、表型的影響。實(shí)驗(yàn)包括細(xì)胞增殖、遷移侵襲實(shí)驗(yàn),流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞周期、鈣離子濃度、活性氧水平、凋亡,細(xì)胞內(nèi)總谷胱甘肽含量測(cè)定等。還通過(guò)Western Blot檢測(cè)相關(guān)通路蛋白的變化,研究CHAC2可能的調(diào)控機(jī)制,重點(diǎn)觀測(cè)細(xì)胞凋亡和自噬情況。還通過(guò)異體種植腫瘤模型進(jìn)一步觀察CHAC2在體內(nèi)對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果:CHAC2在所有檢測(cè)的胃腸腫瘤細(xì)胞系中蛋白表達(dá)量明顯降低。免疫組化結(jié)果顯示:與正常胃腸粘膜組織相比,CHAC2蛋白

4、表達(dá)水平在大多數(shù)胃腸腫瘤組織中顯著下降,且與胃癌和結(jié)直腸癌的分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和總生存期等顯著相關(guān)。CHAC2高表達(dá)患者的3年存活率明顯比低表達(dá)的患者高(胃癌P＜0.001,結(jié)直腸癌P=0.001)。相較于對(duì)照組,CHAC2轉(zhuǎn)染株細(xì)胞在體內(nèi)、外的生長(zhǎng)、增殖和遷移能力都受到抑制。流式細(xì)胞術(shù)和Western Blot結(jié)果顯示CHAC2可以促進(jìn)凋亡和自噬,提升細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度和活性氧水平,并損耗谷胱甘肽,參與到非折疊蛋白反應(yīng)中。