PF4通過TLR4-NF-κB信號(hào)途徑上調(diào)巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá).pdf

1、研究背景:
　　動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥性病理發(fā)展過程,血管壁的炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。已有研究證據(jù)顯示,早在動(dòng)脈粥樣硬化病變的初期,血小板作為一種炎性細(xì)胞,就參與引起血管內(nèi)皮活化損傷等反應(yīng)過程。血小板因子4(PF4)是血小板活化后釋放出的含量最多的蛋白之一,越來越多的研究證據(jù)表明,PF4參與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程。但由于至今未能確定PF4的特異性細(xì)胞表面受體,PF4在動(dòng)脈粥樣硬化中的具體作用機(jī)制還不十分清

2、楚。TLR4是TOLL樣受體家族成員之一,它在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn),在人粥樣斑塊病變處TLR4存在高表達(dá),并且證實(shí),正是由于TLR4的識(shí)別功能,導(dǎo)致一系列與AS有關(guān)的細(xì)胞因子被合成釋放,其中包括基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)等。MMP-9在粥樣硬化斑塊處的血管重構(gòu)、斑塊的不穩(wěn)定性及其破裂誘發(fā)的血管疾病中都起著很重要的作用,提示TLR4信號(hào)通路不僅激活動(dòng)脈粥樣硬化過程中的固有免疫反應(yīng),還參與血管重塑過程。本研究以

3、THP-1源性巨噬細(xì)胞為觀察對(duì)象,探討PF4是否通過TLR4介導(dǎo)的信號(hào)途徑來調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞MMP-9的表達(dá),為血小板活化在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:
　　通過觀察PF4對(duì)巨噬細(xì)胞MMP-9表達(dá)影響,研究TLR4/NF-κB信號(hào)途徑在PF4調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞MMP-9表達(dá)中的作用,以期探討PF4對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的可能影響。
　　方法:
　　培養(yǎng)THP-1單核細(xì)胞,采用PMA誘導(dǎo)細(xì)胞分化為

4、貼壁的巨噬細(xì)胞,無血清培養(yǎng)基同步化12小時(shí)后開始實(shí)驗(yàn)。
　　1.采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)THP-1源性巨噬細(xì)胞MMP-9和TLR4mRNA的表達(dá)情況。
　　2.選擇0 ng/ml、25 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml濃度的PF4處理細(xì)胞,RT-PCR技術(shù)檢測(cè)MMP-9和TLR4mRNA的表達(dá)變化,Western Blotting技術(shù)檢測(cè)MMP-9和TLR4蛋白的表達(dá)變化,ELISA技術(shù)檢

5、測(cè)NF-κB蛋白的表達(dá)變化。
　　3.觀察TLR4阻斷劑對(duì)PF4誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞MMP-9表達(dá)的影響, RT-PCR和Western Blotting技術(shù)分別檢測(cè)細(xì)胞MMP-9的mRNA和蛋白表達(dá)變化, ELISA技術(shù)檢測(cè)NF-κB蛋白表達(dá)變化。
　　4.觀察NF-κB阻斷劑對(duì)PF4誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞MMP-9表達(dá)的影響, RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞MMP-9mRNA表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
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