蒲公英和甘草代謝物的抗腫瘤活性物質基礎研究.pdf

1、目前,臨床上針對乳腺癌和宮頸癌的主要治療方法有化療、放療和手術治療。手術治療對病人的正常生活影響較大,化療和放療一定程度上可以發(fā)揮治療作用,但其耐藥性和毒副作用往往導致治療無法繼續(xù)進行。傳統(tǒng)中藥具有多作用靶點,毒副作用低等優(yōu)點,可以有效避免耐藥性的產(chǎn)生。建立全面反映中藥活性的方法,將更加有效地體現(xiàn)中藥成分的整體性和綜合作用,從而對更好地評價中藥的質量具有深遠的理論意義和現(xiàn)實意義。
　　基于進入體內的化學成分通過代謝最終排入尿和膽汁

2、,本研究采用中藥直接作用物質基礎理論的研究思路,以口服蒲公英和甘草提取液后的大鼠尿液為研究對象,以MCF-7人乳腺癌細胞和Hela宮頸癌細胞為考察對象,結合 MTT法、PI單染法考察了蒲公英和甘草的體內直接作用物質對細胞的增殖和周期的影響;綜合應用多種現(xiàn)代分離技術,分析含藥尿液及其抗乳腺癌活性部分,闡明蒲公英和甘草在體內的直接作用物質和其抗乳腺癌的物質基礎。具體內容分為以下三個部分:
　　1.用含藥尿液作為藥物源加入離體反應系統(tǒng)中

3、,采用MTT法對蒲公英和甘草的含藥尿對MCF-7乳腺癌細胞和Hela宮頸癌細胞的抑制活性進行了考察。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),蒲公英和甘草的提取物在體內均具有抑制腫瘤細胞增殖的活性。并且采用PI單染法考察了大鼠含藥尿對MCF-7乳腺癌細胞和Hela宮頸癌細胞周期的影響。結果顯示兩種癌細胞均被蒲公英提取物的含藥尿阻滯在G2/M期。甘草提取物使MCF-7細胞的S期和G2/M期增加,G1期減少。
　　2.利用超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質譜,對大

4、鼠灌胃給藥后體內蒲公英和甘草提取物的吸收成分、代謝物鑒定進行了初步探索。將中藥提取液和大鼠尿液用甲醇提取后,采用UPLC-Q-TOF電噴霧正、負離子模式,對蒲公英和甘草的提取物、空白尿樣和灌胃后的大鼠尿樣進行定性分析。蒲公英水提物中共檢測到78個質譜峰,含藥尿中檢測到蒲公英的13個質譜峰;甘草水提物和醇提物共檢測到62個質譜峰,含藥尿中檢測到甘草的25個質譜峰,并且借助Metabolynx分析了代謝產(chǎn)物。
　　3.綜合應用現(xiàn)代分離

5、技術,進一步篩選蒲公英水提液在體內具有抗腫瘤活性的原型成分或代謝產(chǎn)物。使用高效液相色譜對蒲公英水提液含藥尿進行分段,分段后的尿液采取 MTT方法進行抗腫瘤活性篩選,對具有顯著抑制MCF-7細胞增殖的分段含藥尿進行GC-MS分析。研究發(fā)現(xiàn),經(jīng) HPLC分段后的第5、第6和第12段蒲公英含藥尿對MCF-7細胞的抑制率最高,通過GC-MS分析,在這三段中共有22個入血成分和代謝產(chǎn)物。經(jīng)分析蒲公英萜醇和羽扇豆醇很有可能是蒲公英提取物中抑制MCF