TTP對小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1調(diào)控的研究.pdf

1、目的:乳腺癌作為一種惡性腫瘤已躍居全球女性發(fā)病率排行之榜首，嚴(yán)重危害女性的身心健康和生命。常規(guī)的手術(shù)、放化療及抗癌藥物的治“表”手段并不能很好的解決復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的難題，這就使得基因治療作為一種新興的技術(shù)倍受關(guān)注，將之運(yùn)用于乳腺癌的研究中，成績也日漸突顯。TTP(trisetetraprolin)是鋅指蛋白的一種，具有依賴鋅離子存在的自我高度螺旋成手指狀的立體結(jié)構(gòu)域。從TTP基因敲除小鼠的動物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，TTP是與免疫反應(yīng)、炎癥和

2、造血相關(guān)聯(lián)的[1]。有研究顯示，TTP在一些腫瘤中的表達(dá)是降低的[2]，本實(shí)驗(yàn)擬探討TTP基因過表達(dá)對乳腺癌的影響。
　　 方法:
　　 1.選擇構(gòu)建好的質(zhì)粒PCR3.1和質(zhì)粒PCR3.1+mTTP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染乳腺癌腺癌4T1細(xì)胞系，通過鏡下觀察和細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)來檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞系的生物學(xué)性狀，并用實(shí)時定量PCR的方法檢測TTP的表達(dá)情況
　　 2.將4T1細(xì)胞、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PCR3.1的4T1細(xì)胞和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染PCR3.1+m

3、TTP的4T1細(xì)胞用流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況、免疫印跡法檢測mTTP蛋白表達(dá)、MTT法檢測細(xì)胞增殖情況。
　　 3.建立荷瘤小鼠動物模型，觀察腫瘤大小變化和肺轉(zhuǎn)移灶、用實(shí)時定量PCR檢測mCXCR4和mCXCR7的表達(dá)、流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血PBMC中Th17和Th1亞群。
　　 結(jié)果:
　　 1.用質(zhì)粒PCR3.1和PCR3.1+mTTP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染4T1細(xì)胞系，實(shí)時定量PCR檢測mTTP的表達(dá)情況，4T1細(xì)胞

4、轉(zhuǎn)染PCR3.1+mTTP之后，mTTP的表達(dá)明顯增高，細(xì)胞形態(tài)并未發(fā)生改變，可以進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞生物學(xué)方面的研究。
　　 2.流式細(xì)胞技術(shù)檢測4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三種細(xì)胞的凋亡狀況，結(jié)果表明三種細(xì)胞系凋亡無顯著性差異，加入促凋亡藥Staurosporine培養(yǎng)6小時后再次檢測細(xì)胞凋亡，測得4T1(PCR3.1+mTTP)細(xì)胞凋亡增加，凋亡率為29.5％，而4T1，4T1(PCR3.1)細(xì)

5、胞的凋亡率為17％和18％。
　　 3.在4T1，4T1(PCR3.1)和4T1(PCR3.1+mTTP)三組細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞劃痕試驗(yàn)，三種細(xì)胞系的細(xì)胞遷移能力并無明顯差異。使用MTT法檢測三種細(xì)胞增殖的能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染mTTP的細(xì)胞可以降低乳腺癌細(xì)胞的增殖能力。
　　 4.在荷瘤小鼠動物模型中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染mTTP的乳腺癌細(xì)胞接種小鼠后腫瘤的大小和未轉(zhuǎn)染mTTP的細(xì)胞相比，明顯減小，并且肺轉(zhuǎn)移灶減少，說明mTTP可以影響小

6、鼠乳腺癌的大小和轉(zhuǎn)移。
　　 5.用實(shí)時定量PCR檢測4T1腫瘤組織與正常乳腺組織中的mCXCR4&mCXCR7的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在腫瘤組織中mCXCR4&mCXCR7的表達(dá)明顯增高。mTTP轉(zhuǎn)染的4T1細(xì)胞使得mCXCR4的表達(dá)升高而mCXCR7的表達(dá)降低。
　　 6.流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血PBMC的Th1和Th17亞群。接種4T1(PCR3.1+mTTP)細(xì)胞后的外周血Th17數(shù)量增加，Th1則無明顯變化。