慢病毒載體介導紅色熒光蛋白基因轉染人膀胱癌細胞的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、山西醫(yī)科大學碩士學位論文慢病毒載體介導紅色熒光蛋白基因轉染人膀胱癌細胞的研究姓名：宋濤申請學位級別：碩士專業(yè)：泌尿外科學指導教師：楊曉峰20090501山西醫(yī)科大學七年制臨床醫(yī)學碩士專業(yè)學位論文Thestudyoftransfectionexperimentofhumanbladdercarcinomacel1mediatedbyLentiviralvectortagged‘t1RFPCaralnomacemecllateclDyent

2、lVlravectortaggedW111tgeneABSTRACTObjective：tostudythepossibilityoftheRedFluorescentProtein(RFP)geneactsasReporterGeneinlivecells，wespeciallyconstructtherecombinationthree—plasmidlentiviralvectorstaggedwithRFP，andtransfe

3、ctthehumanbladdercarcinommercell(BCC)，T一24cell1ineObservetheresultafterthetransfectionaccomplishedundertheConfocalLaserFluoresecenceMicroscopyMethod：Totransfectthe293Tcel1withtheviralpackagingcel1byusingtheRFP—Lentivirus

4、recombination(LVCMV—RFP)andbothpHelper10andpHelper20vectorsaccordingtotheLipofectamine2000methodAfterincubatingthemfor34days，harvestandrefinethevirussolutionFetchthesolution，ingatherandconcentratethevirussolutionPackages

5、omeofthematthetemperatureof一80℃forlong—termsavingTheleftsolutionwasleftforthetitertestbytheReal—TimewayorholedilutionwayCulturetheT24cell1inein96WellPlatesandvirusofspecifiCconcentrationintheairincubatorindifferentMOIpro

6、portionfor72—’96hourstogropethebestconditionfortransfectingTransfectthetargetcellrepeatlyaccordingtheresultofthepre—testaboveObservethecel1SundertheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopywiththe558nmexcitingwavelengthand583

7、nmemitingwavelengthIdentifyingtheexpressionofRFPgeneandtransfectionefficiencybyFlowCytometryAfterthatCO—culturetheT一24cellandtransfectedT一24cel1toobservetheirgrowingpropertyResult：Successfullyconstructingtherecombination

8、ofthree——plasmidlentiviralvectorstaggedwithRFPAftertransfectingthecarcinomacell1ine，thecell1inestronglyemittheredfluorescenceundertheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopyConclusion：Ds—RedgenecansuccessfullyexpressinT一24ce

9、llinformofthree—plasmidlentiviralvectors，SOthelivecarcinomacellScanbediredtlyvisualizedbytheConfocalLaserF1uoresecenceMicroscopyviatheredfluoresecentoftransfectedcellSthemselvesItiSsuggestedthatDs—Redgenebeafavourablerep

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