日本血吸蟲童蟲期別體被蛋白T輔助細(xì)胞表位預(yù)測(cè)及初步鑒定.pdf

1、日本血吸蟲病是一種危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病，嚴(yán)重影響我國包括農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)在內(nèi)的社會(huì)經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展，應(yīng)用抗血吸蟲疫苗免疫人畜以阻斷血吸蟲病的傳播是公認(rèn)的長(zhǎng)期有效的控制策略。安全高效實(shí)用的血吸蟲分子疫苗的研發(fā)，由于鑒定保護(hù)性抗原遇到挑戰(zhàn)，一直難以突破。以模擬輻照致弱尾蚴疫菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的、由Th1細(xì)胞介導(dǎo)的、靶向童蟲的高保護(hù)性免疫效應(yīng)機(jī)制，來發(fā)現(xiàn)抗血吸蟲的分子疫苗，可能是重要的突破口之一。本研究應(yīng)用反向疫苗學(xué)技術(shù)從日本血吸蟲轉(zhuǎn)錄本組中鑒別出

2、童蟲期別體表蛋白分子，預(yù)測(cè)其潛在的Th細(xì)胞表位，同時(shí)對(duì)其進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)鑒定，為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)源于血吸蟲童蟲體被分子的保護(hù)性T細(xì)胞抗原奠定基礎(chǔ)。 本研究從國家人類基因組南方研究中心提供的日本血吸蟲肝童蟲期EST序列18，579條，從中篩選出童蟲期別體表蛋白373條，對(duì)其進(jìn)行ORF識(shí)別，用基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、隱馬爾科夫模型、及權(quán)重矩陣分析上述序列的信號(hào)肽及跨膜結(jié)構(gòu)，從373條日本血吸蟲肝期童蟲體被蛋白序列中篩得14條具有ORF結(jié)構(gòu)及信號(hào)肽結(jié)

3、構(gòu)的序列。 應(yīng)用免疫信息學(xué)技術(shù)進(jìn)行候選序列Th細(xì)胞表位預(yù)測(cè)。應(yīng)用基于結(jié)合基序、矩陣法和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等方法的多個(gè)服務(wù)器預(yù)測(cè)可與人源、鼠源潮MHCⅡ類分子結(jié)合的線性表位肽；應(yīng)用基于分子動(dòng)力學(xué)算法的受體配體嵌合空間結(jié)合模擬服務(wù)器，模擬肽與MHCⅡ分子的錨定情況，得到候選的Th細(xì)胞表位。結(jié)果預(yù)測(cè)得到了5個(gè)十五肽表位序列：NQFIRNLTLKIVLPE[源序列號(hào)AY813997；多萜基二磷酸寡聚糖蛋白葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶類似物]；SSTSQDF

4、PGVCQLCV[AY815893；原鞘脂激活蛋白]；SSLVISYSTVDRLVC[源序列號(hào)AY815893；原鞘脂激活蛋白]；SRNLTVLRTNVALRL[源序列號(hào)AY811606；秀麗隱桿線蟲假象蛋白類似物]TVKFDKTVTCGGAYI[源序列號(hào)AAC00515；鈣網(wǎng)織蛋白家族]。 用人工合成多肽法(四分臂偶聯(lián)法合成到多聚賴氨酸骨架上)合成上述表位肽；MTT法改良技術(shù)CCK—8測(cè)定候選表位肽體外刺激免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞增