20-HETE在血管緊張素Ⅱ引起的心肌細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf

1、20-羥二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid，20-HETE)是細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450，CYP450)ω-羥化酶催化花生四烯酸(arachidonic acid，AA)代謝所生成的產(chǎn)物。它是一種潛在的血管收縮劑，在腎、腦動(dòng)脈和心臟的冠脈循環(huán)中起作用，它可以調(diào)節(jié)AngⅡ、加壓素和去甲腎上腺素的血管收縮反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果顯示20-HETE能夠引起乳鼠心肌細(xì)胞的的凋亡

2、反應(yīng)，在此研究基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)由AngⅡ引起的心肌細(xì)胞凋亡，能夠被20-HETE合成酶抑制劑HET0016所抑制，這顯示AngⅡ引起的心肌細(xì)胞凋亡可能被20-HETE所介導(dǎo)。方法及結(jié)果如下:1）通過(guò)流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HET0016能夠顯著抑制由AngⅡ引起的心肌細(xì)胞凋亡率的提高。與對(duì)照組相比，經(jīng)過(guò)AngⅡ(100 nM)處理后的心肌細(xì)胞的存活率顯著降低，而凋亡細(xì)胞的比率則明顯升高，凋亡細(xì)胞的比率約達(dá)到35.4±8.5％; HET001

3、6顯著的抑制了AngⅡ引起的心肌細(xì)胞凋亡率的提高，使AngⅡ引起的凋亡細(xì)胞的比率下降到14.9±2.6％。2）利用激光共聚焦顯微鏡，以JC-1為熒光探針檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HET0016能夠顯著抑制由AngⅡ引起的心肌細(xì)胞線粒體膜電位的下降;3）利用分光光度法和Hoechst染色發(fā)現(xiàn)，HET0016能夠顯著的抑制AngⅡ引起的Caspase-3活性的升高，并能夠降低AngⅡ引起的細(xì)胞核凋亡反應(yīng)的發(fā)生;4）RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)