發(fā)展檢測腸病毒71型(EV71)感染之單克隆抗體研究.pdf

1、目的：作為現(xiàn)今最為流行的嗜神經(jīng)性病毒之一，腸病毒71型（enterovirus type71, EV71）近年來在亞太地區(qū)頗為盛行，引起各國政府高度重視。本課題旨在制備獲得抗EV71單克隆抗體，鑒定并分析其應用及生物學功能，以探討其于臨床診斷治療及抗病毒天然物篩選等方面的應用。
　　方法：以EV71 Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠，采用B淋巴細胞雜交瘤技術進行細胞融合，以EV71感染之RD（Human Rh

2、abdomyosarcoma，人橫紋肌肉瘤）細胞作為抗體篩選細胞，經(jīng)IFA（Immunofluorescence assay，免疫熒光）反復篩選及克隆化培養(yǎng)，最終得到能夠穩(wěn)定分泌抗EV71單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞株，并對其抗體亞型及特異性進行鑒定。對各株抗體在FCM（flow cytometry，流式細胞）、Western blot、capture-ELISA（抗原捕獲ELISA）、病毒中和等實驗中的應用進行分析，并通過peptide

3、-ELISA（肽段-ELISA）鑒定得各自相應抗原識別表位。應用所得抗體進行病毒檢測及天然萃取物抗病毒功效鑒定。
　　結果：（1）共篩選得到5株能夠分泌抗EV71單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27。除mAb26亞型為IgM,κ外，其余均為IgG2a,κ；（2）5株單克隆抗體，均可特異性識別EV71病毒，而不與CVA16（柯薩奇病毒A組16型）病毒、ECHO6（埃可病毒6型

4、）病毒交叉反應；（3）抗體均可應用于IFA、FCM、Western blot、capture-ELISA等實驗，進行EV71的檢測及鑒定；（4）mAb22及mAb24具有EV71病毒中和作用；（5）除mAb27結合的抗原決定表位為病毒VP1的N-端線性表位：DVIESSIGDSVSRAL外，mAb21、mAb22、mAb24和mAb26均識別位于VP1的構象型抗原決定表位；（6）抗體可用于天然萃取物抗病毒功效鑒定等相關研究。