siRNA靶向沉默F(xiàn)LIP基因?qū)η傲邢侔㏄C3細胞的體外抑制作用.pdf

1、背景與目的:
　　Fas相關(guān)死亡域樣白介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白(cellular-FLICE inhibitory protein,c-FLIP),簡稱FLIP,研究發(fā)現(xiàn)其過量表達于各類腫瘤細胞中,通過競爭性抑制Fas, TNFR-1, DR4及TRAILR等死亡受體介導的細胞凋亡途徑中的caspase-8(半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶8)凋亡蛋白而阻止細胞凋亡程序,促使腫瘤細胞過量生長。FLIP過量表達于PCa細胞,抑制細胞凋亡,

2、維持細胞過量生長,可能是PCa基因治療的有效靶點。本研究旨在通過siRNA靶向沉默PC3細胞中FLIP基因的表達,探討其作為PCa基因治療靶點的可行性。
　　方法:
　　將體外培養(yǎng)的 PC3細胞分為空白對照組(僅加培養(yǎng)基),陰性對照組(NC-siRNA,脂質(zhì)體)實驗組(FLIPL-siRNA,脂質(zhì)體)。QPCR檢測PC3細胞FLIPL mRNA,caspase-8 mRNA表達水平;western blot檢測PC3細胞FL

3、IPL蛋白表達水平;MTT法檢測PC3細胞生長抑制率;流式細胞術(shù)檢測PC3細胞凋亡率及Transwell模型檢測PC3細胞侵襲性。
　　結(jié)果:
　　1)FLIPL-siRNA轉(zhuǎn)染PC3細胞后48h,QPCR檢測FLIPL mRNA表達水平。相對于空白PC3組與陰性對照PC3組,實驗組PC3細胞的FLIPL mRNA表達水平顯著下降(P<0.001);siRNA-1,siRNA-2,siRNA-3和siRNA-4的抑制率分別為

4、(69.9士2.2)％、(65.7士2.3)%、(75.4士1.6)%和(70.3士3.2)%,其中siRNA-3的抑制作用最強(P<0.05);而空白PC3組和陰性對照PC3組之間FLIPL mRNA的表達水平無顯著差異(P>0.05)。siRNA-3組的caspase-8 mRNA表達水平較空白組和陰性對照組顯著升高(P<0.001),且空白組與陰性對照組之間的mRNA表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2)FLI

5、PL-siRNA轉(zhuǎn)染PC3細胞后48h,Western blot法檢測FLIPL蛋白表達水平。相對于空白PC3組, siRNA-3 PC3組的FLIPL蛋白表達水平顯著降低(P<0.01)。
　　3)MTT,流式細胞術(shù),Transwell模型檢測發(fā)現(xiàn)siRNA-3對PC3細胞生長抑制率,凋亡率,侵襲性等生物學特征的影響有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　　1)實驗發(fā)現(xiàn)FLIP靶向特異性siRNA能在轉(zhuǎn)錄和翻譯