2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、鼻咽癌(NPC)是我國南方地區(qū)常見的一種惡性腫瘤,其發(fā)病機制還不清楚。DNA甲基化修飾是基因表達(dá)調(diào)控的重要表觀遺傳學(xué)機制之一,DNA甲基化修飾導(dǎo)致抑瘤基因等的沉默在癌變過程中發(fā)揮重要的作用。因此,篩選NPC的甲基化失活基因?qū)⒂兄诮沂綨PC的發(fā)病機制,具有重要的理論和應(yīng)用價值。本研究室前期采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較激光捕獲顯微切割純化的NPC組織與正常鼻咽黏膜組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜的差異,發(fā)現(xiàn)NPC組織中14-3-3σ、Annexin A1和SC

2、CA1蛋白質(zhì)表達(dá)降低,但其表達(dá)下調(diào)的機制不清楚。 為探討NPC 14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因表達(dá)下調(diào)是否由啟動子甲基化引起,本研究以4株具有不同分化程度和轉(zhuǎn)移潛能的NPC細(xì)胞系(CNE1、CNE2、5-8F、6-10B)、1株永生化的鼻咽上皮細(xì)胞系NP69,以及75例NPC組織和25例正常鼻咽黏膜組織作為實驗對象,采用甲基化特異性PCR(MSP)、RT-PCR、Western blotting和免疫組織化

3、學(xué)分別檢測14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因啟動子甲基化情況、mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平;利用不同濃度(0、0.1、1、5、10 μmol/L)的去甲基化藥物5-雜氮-2'-脫氧胞苷(5-aza-2dC)處理NPC細(xì)胞株,采用MTT比色檢測細(xì)胞生長,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡。 主要結(jié)果如下:(1)與正常鼻咽黏膜組織比較,NPC組織14-3-3σ(84%VS 28%)、Annexin A1(92%VS

4、 12%)和SCCA1(87%VS 22%)基因啟動子出現(xiàn)高頻甲基化;(2)在14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因啟動子完全甲基化NPC組織中,其mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)缺失;在14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因啟動子不完全甲基化NPC組織中,其mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)顯著低于未甲基化的NPC組織;14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因甲基化與其表達(dá)水平高度負(fù)相關(guān);(3)14-3-3σ、Ann

5、exin A1、SCCA1基因啟動子甲基化與NPC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān);(4)NP69細(xì)胞系14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因啟動子未甲基化,4株NPC細(xì)胞系14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因啟動子均存在不同程度的甲基化,而且其甲基化程度與細(xì)胞系的分化程度和轉(zhuǎn)移潛能有關(guān),分化程度越低甲基化程度越高,轉(zhuǎn)移潛能越大甲基化程度越高;(5)NPC細(xì)胞系14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1mRNA表達(dá)水

6、平低于NP69細(xì)胞;(6)5-aza-2dC呈濃度依賴性地抑制4株NPC細(xì)胞系14-3-3σ、Annexin A1和SCCA1基因甲基化,上調(diào)其mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá);(7)5-aza-2dC呈濃度依賴性地抑制4株NPC細(xì)胞系的生長,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯,而且高分化CNE1和無轉(zhuǎn)移6-10B細(xì)胞對藥物的敏感性高于低分化CNE2和高轉(zhuǎn)移5-8F細(xì)胞。 本研究首次報道14-3-3σ、AnnexinA1和SCCA1基因在NP

7、C中出現(xiàn)高頻甲基化,啟動子甲基化是導(dǎo)致NPC 14-3-3σ、AnnexinA1和SCCA1基因表達(dá)缺失或降低的原因之一,14-3-3σ、AnnexinA1和SCCA1基因是新的NPC甲基化沉默基因;本研究發(fā)現(xiàn)14-3-3σ、AnnexinA1和SCCA1啟動子甲基化與NPC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān),提示14-3-3σ、AnnexinA1和SCCA1啟動子甲基化可能成為預(yù)測NPC轉(zhuǎn)移的指標(biāo);本研究結(jié)果顯示去甲基化藥物5-aza-2dC能抑制NP

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