741毛白楊等再生體系建立及YCPA2基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、本研究以小×胡楊(Populus simonii×P．euphratica)、741毛白楊(PopulusaIba×(P.davidiana×P.simonii)×P. tomentosa)為試材，進行了再生體系、農(nóng)桿菌介導的抗逆基因轉(zhuǎn)化研究，以期培育出抗逆境的基因工程楊樹新品系。主要結果如下： 1、以小×胡楊為研究對象，在建立組培再生體系過程中出現(xiàn)了外植體褐化現(xiàn)象，對影響小X胡楊組培中褐化的因素進行了研究，并在一定程度上控制了

2、小×胡楊褐化的發(fā)生，為下一步組織培養(yǎng)奠定了基礎。試驗結果表明：6-BA和IBA濃度的變化對褐化現(xiàn)象基本沒有影響；外植體經(jīng)過5℃，12h預處理、使用1/2MS培養(yǎng)基、低溫暗處理和常溫暗處理都能在一定程度上減輕褐化；抗氧化劑和吸附劑對褐化控制作用較為明顯，其中PVP效果較好，VC次之，Na<,2>S<,2>O<,3>最差。 2、通過對741毛白楊的組培再生體系的優(yōu)化，得到了高頻再生體系，同時闡述了激素濃度、葉片來源、黑暗培養(yǎng)、葉片放

3、置方式等對葉片再生體系的影響。741毛白楊無菌苗葉片的最佳不定芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BAl.0mg/L+IBA0.1mg/L;選擇無根的無菌試管苗的葉片作為試驗材料，進行3d黑暗培養(yǎng)等方法都可提高不定芽誘導效率；不走芽繼代培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L;不定芽生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.05mg/L。741毛白楊葉片不定芽誘導的潮霉素臨界濃度為3mg/L;不定芽生根潮霉素臨界濃度為5mg／L；

4、在篩選過程中選用Cef400mg/L作為抑菌抗生素濃度。 3、對影響農(nóng)桿菌介導的楊樹遺傳轉(zhuǎn)化的幾個因素進行了探討。結果表明，MS液體培養(yǎng)基作為工程菌液獲得的抗性芽再生頻率明顯高于YBP液體培養(yǎng)基作為工程菌液獲得的抗性芽再生頻率；共培養(yǎng)時間不同潮霉素抗性芽誘導率也不同，共培養(yǎng)時間為3d時，誘導率最高，與其他處理差異顯著；共培養(yǎng)培養(yǎng)基加入乙酰丁香酮時，pH調(diào)到5.2誘導潮霉素抗性芽效果最顯著；在本試驗中，推遲篩選對轉(zhuǎn)化效率的影響不大