RNAi技術(shù)阻斷多藥耐藥基因表達(dá)提高乳腺癌化療敏感性.pdf

1、本文對(duì)RNAi技術(shù)阻斷多藥耐藥基因表達(dá)提高乳腺癌化療敏感性進(jìn)行了探討。本研究選用耐阿霉素人乳腺癌細(xì)胞系MCF7/ADR及其藥物敏感細(xì)胞系MCF7作為研究對(duì)象。設(shè)計(jì)合成一對(duì)針對(duì)mdr1基因的shRNA，定向克隆入真核表達(dá)載體pENTR<'TM>/U6，構(gòu)建pENTR<'TM>/U6 MDR1重組質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)化質(zhì)粒到大腸桿菌中，經(jīng)過克隆、擴(kuò)增、純化后慢病毒包裝，轉(zhuǎn)染進(jìn)MCF7/ADR細(xì)胞；空載體pENTR<'TM>/U6轉(zhuǎn)染作為對(duì)照，10μ

2、g/ml Blasticidin篩選2周，存活的轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞為篩選的靶基因沉默細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)從蛋白水平檢測(cè)P-gp的表達(dá)率，羅丹明試驗(yàn)測(cè)定P-gp功能變化，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分析，從基因轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)MDRl基因的表達(dá)率，MTT法檢測(cè)阿霉素對(duì)MCF-7/ADR細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。研究表明：經(jīng)RNAi后，MCF-7/ADM細(xì)胞系mdr1mRNA表達(dá)下降，p-gp表達(dá)水平下調(diào)，MTT法測(cè)試對(duì)ADM敏感性增加。shR