紫杉醇誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)的產(chǎn)生是惡性腫瘤化療失敗的主要原因之一，這種現(xiàn)象在乳腺癌的治療過(guò)程中表現(xiàn)極為突出。本論文主要通過(guò)化療藥紫杉醇體外短期干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，測(cè)定其藥敏性變化，并研究其耐藥相關(guān)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡等方面的變化，為從分子水平分析耐藥細(xì)胞的各項(xiàng)機(jī)制提供依據(jù)，同時(shí)也為臨床用藥提供參考。
　　 本課題首先用紫杉醇體外短期干預(yù)MDA-MB-231細(xì)胞

2、，利用黃酰羅丹明B(SRB)法檢測(cè)干預(yù)后的細(xì)胞對(duì)多種化療藥物藥敏性的改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞經(jīng)紫杉醇干預(yù)后其對(duì)包括阿霉素、米托蒽醌等在內(nèi)的多種化療藥物的半數(shù)抑制率(IC50)提高，即產(chǎn)生了一定的耐藥性。
　　 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)了包括P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRPl)和肺耐藥蛋白(LRP)等多種耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)差異。結(jié)果顯示除P-gp蛋白表達(dá)上調(diào)外，其余多種耐藥相關(guān)蛋白均無(wú)明顯表達(dá)差異。

3、逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)進(jìn)一步證明P-gp的基因MDRl表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)。這說(shuō)明MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)紫杉醇體外短期干預(yù)后MDRl在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上發(fā)生改變。
　　 流式細(xì)胞術(shù)分析紫杉醇干預(yù)后細(xì)胞周期的變化，結(jié)果顯示MDA-MB-231經(jīng)干預(yù)后8h S期細(xì)胞明顯增多。免疫細(xì)胞化學(xué)和western blot檢測(cè)周期依賴型轉(zhuǎn)錄因子Y-box結(jié)合蛋白1(YB-1)的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)干預(yù)8h后的細(xì)胞其胞漿內(nèi)YB-1表達(dá)下降而胞核內(nèi)YB

4、-1表達(dá)上調(diào)，提示YB-1可能參與MDR現(xiàn)象。
　　 Hoechst33342染色并經(jīng)過(guò)熒光倒置顯微鏡分析，結(jié)果顯示MDA-MB-231經(jīng)干預(yù)后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡抑制現(xiàn)象。
　　 本實(shí)驗(yàn)用紫杉醇短期干預(yù)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的藥敏性降低。同時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中P-gp蛋白表達(dá)上調(diào)、YB-1核定位增加以及細(xì)胞出現(xiàn)凋亡抑制等現(xiàn)象。以上結(jié)果說(shuō)明了化療藥作為體外脅迫條件可瞬時(shí)誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，且這種耐藥性是多因素共