質(zhì)譜法與直接測序法檢測HBV P基因耐藥突變的比較研究.pdf

1、目的：用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜法(MALDI-TOF MS)和PCR產(chǎn)物直接測序法兩種方法檢測乙型肝炎病毒P基因耐藥位點的突變情況，并進行比較分析，進一步證實MALDI-TOF MS是一種快速、早期、準確發(fā)現(xiàn)核苷（酸）類藥物治療后耐藥位點的檢測方法。
　　 方法：⑴收集90例服用拉米夫定等核苷（酸）類藥物治療1年以上，HBV-DNA仍大于500 copies/ml的慢性乙型病毒性肝炎患者血清，并根據(jù)核苷（酸）類藥物用藥

2、情況分為6個組；同時收集10名HBsAg陽性時間超過6個月，肝功能正常，HBV-DNA＞1×105 copies/ml，始終未予抗病毒治療的慢性乙型病毒性肝炎患者的血清作為對照組。⑵采用MALDI-TOF MS檢測HBV P基因已知11個變異位點的變異情況；基于SEQUENON公司質(zhì)譜儀及配套芯片-試劑盒技術，通過TYPE4.0軟件分析結果；PCR產(chǎn)物直接測序法采用ABI3730XL測序儀，通過SequenceNavigator軟件分析

3、得出序列。
　　 結果：①兩種方法檢出結果比較：在服用拉米夫定等核苷（酸）類藥物的90例病例血清中，MALDI-TOF MS測得53例耐藥變異的病例，共86個耐藥突變位點，PCR產(chǎn)物直接測序法僅檢測出19例耐藥變異的病例，共29個耐藥突變位點，MALDI-TOF MS檢出數(shù)明顯高于直接測序法，兩者間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；在對照組中兩種檢測方法均沒有發(fā)現(xiàn)已知的耐藥變異位點。②兩種方法檢測DNA的靈敏性比較：HBV-D

4、NA水平在500-1000 copies/ml的12例血清中，MALDI-TOF MS測得6例出現(xiàn)耐藥變異位點，檢出率50％，而PCR產(chǎn)物直接測序法在此病毒水平下未檢出耐藥變異位點；在相同的HBV-DNA水平下，MALDI-TOF MS變異檢出數(shù)（率）均高于PCR產(chǎn)物直接測序法，兩者間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。③MALDI-TOF MS檢測準確性的結果分析：MALDI-TOF MS檢測結果中，所用藥物與拉米夫定耐藥位點相關的5

5、組中，檢測到的變異位點與該藥物已知的常見變異位點完全相符，相符率100％；單用阿德福韋酯組檢出的變異位點與該藥物已知的常見變異位點只部分相符，相符率70％。
　　 結論：⑴MALDI-TOF MS對已知耐藥位點的檢出數(shù)（率）高于PCR產(chǎn)物直接測序法；⑵MALDI-TOF MS對已知耐藥位點的檢出的DNA靈敏性高于PCR產(chǎn)物直接測序法。⑶MALDI-TOF MS準確性高，檢測到已知耐藥位點和實際用藥耐藥位點的相符率高。⑷MALDI