CTV p20和p23基因原核表達及不同分離株中p25蛋白與病毒含量分析.pdf

1、柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑橘衰退病是一種具有經濟重要性的病害，廣泛分布于世界各柑桔產區(qū)，對全世界的柑桔產業(yè)造成了嚴重的威脅。CTV是長線形病毒屬（Closterovirus）正義單鏈RNA（+ssRNA）病毒，具有12個開放讀碼框(ORF)，可以編碼19種以上的蛋白質產物。CTV經橘蚜以非循回半持久方式傳播。本研究構建基因20和p23的原核表達載體，并誘導表達蛋白p20和p23。應用大外殼

2、蛋白p25的多克隆抗體，使用ELISA方法分析不同蚜蟲傳毒率CTV分離株中蛋白含量，并應用實時熒光定量分析不同毒源中病毒粒子相對含量，利用薄膜飼喂法使蚜蟲獲得重組蛋白p20、p25和p27并在毒源植株上獲毒，分析蚜蟲獲毒量及傳毒率的差異。本研究為CTV的流行病學、蚜傳機制、蚜蟲-CTV-寄主相互作用的研究提供了基礎。
　　主要研究結果如下:
　　1.根據(jù)pET28a和pET22b多克隆位點及p20和p23核苷酸序列設計引物，

3、進行基因克隆并測序，測序準確的單克隆經酶切連接后轉化到BL21(DE3)，誘導表達p20和p23融合蛋白。
　　2.應用p25多克隆抗體，使用ELISA方法分析不同蚜蟲傳毒率CTV分離株中蛋白含量，以毒源CT11A、CT14A、CT16-2、CT77和CT立間的葉片為樣品，陰陽結果OD405的比值分別為2.7246、1.6607、1.1093、0.8508、0.8366，表明p25蛋白含量在毒源CT11A、CT14A、CT16-2

4、、CT77和CT立間中依次遞減。
　　3.應用相對RT-qPCR分析不同毒源中病毒粒子含量，結果表明CTV不同分離株系CT11A、CT14A和CT16-2的病毒粒子含量依次遞減，但毒源中病毒粒子含量與蚜蟲傳毒能力高低不完全一致，這表明病毒濃度是影響傳毒率的因素之一，可能其它因素也影響CTV的蚜蟲傳播。
　　4.在褐色橘蚜人工飼料中添加原核表達的重組蛋白p25、p27和p20，蚜蟲再獲毒CT11A、CT16-2和CT立間，應用