煙草hsr203J啟動子驅(qū)動花生幾丁質(zhì)酶基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化花生的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究克隆了煙草誘導(dǎo)型啟動子hsr203J及花生幾丁質(zhì)酶基因（Ah-chi）全長cDNA序列。將hsr203J替換掉pCAMBIA1301上的CaMV35S啟動子，用Ah-chi替換掉pCAMBIA1301上的GUS基因，構(gòu)建了hsr203J啟動子驅(qū)動的Ah-chi的植物表達(dá)載體。分別通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和花粉管注射法轉(zhuǎn)化花生，獲得了轉(zhuǎn)基因植株，PCR擴(kuò)增結(jié)果表明hsr203J及Ah-chi均已成功導(dǎo)入到花生中。主要研究結(jié)果如下:
　

2、　 1.從煙草中克隆得到病原物誘導(dǎo)型啟動子hsr203J，該片段大小為1153bp，與GenBank中已注冊的序列（序列號:X77136）同源性為99.83％，雖有3個堿基的突變，但突變均未發(fā)生在啟動子序列的關(guān)鍵調(diào)控活性區(qū)域。
　　 2.提取花生葉片總RNA，根據(jù)GenBank中已注冊的序列（序列號:X82330）設(shè)計(jì)特異引物擴(kuò)增得到花生幾丁質(zhì)酶基因全長cDNA，經(jīng)測序分析知該片段長899bp，與GenBank中已注冊序列同源

3、性為100％，該序列已在GenBank上登記(HQ439775)。
　　 3.將hsr203J替換掉pCAMBIA1301上的CaMV35S啟動子，用Ah-chi替換掉pCAMBIA1301上的GUS基因，分別成功構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-hsr203J、pCAMBIA1301-Chi和pCAMBIA1301-hsr203J-Chi。
　　 4.用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和花粉管注射法將各表達(dá)載體轉(zhuǎn)化花生，均獲得了分

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