農(nóng)桿菌介導(dǎo)BT基因轉(zhuǎn)化大蔥的研究.pdf

1、近幾年大蔥蟲(chóng)害滋生蔓延，給大田生產(chǎn)造成巨大損失，利用藥劑防治，投資大效果不理想，且污染環(huán)境；為了提高大蔥的抗蟲(chóng)性，我們開(kāi)展了大蔥再生體系和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化大蔥體系的研究?？瓜x(chóng)大蔥培育成功，將有望在抗蟲(chóng)大蔥育種中發(fā)揮作用，為大蔥的抗蟲(chóng)育種研究提供技術(shù)積累。 以章丘大蔥種子及對(duì)種子進(jìn)行的處理作為外植體，進(jìn)行組織培養(yǎng)，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將Bt基因、gus基因等轉(zhuǎn)化愈傷組織，獲得的結(jié)果如下： 1.優(yōu)化了章丘大蔥組織培養(yǎng)體系。對(duì)種子、

2、切口處理的種子和中切處理的種子進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，結(jié)果表明：最佳外植體為中切處理的種子，愈傷誘導(dǎo)率最高為72.97％。 2.Cef的抑菌濃度的確定。農(nóng)桿菌侵染大蔥愈傷組織后，用Cef來(lái)抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，通過(guò)染菌愈傷率和愈傷組織褐化率確定最佳使用濃度為300mg/L。 3.建立了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化大蔥的體系。試驗(yàn)中通過(guò)gus基因染色確定了農(nóng)桿菌侵染大蔥愈傷組織最佳組合為采用OD600值為0.6的農(nóng)桿菌懸浮液浸泡大蔥愈傷組織，感染時(shí)間

3、30min，侵染后在其pH值5.6、25℃、黑暗條件下共培養(yǎng)3d，所得到抗性愈傷組織的比率最高，gus基因表達(dá)率高達(dá)43.99％。 4.獲得轉(zhuǎn)Bt基因的植株。經(jīng)對(duì)轉(zhuǎn)化獲得256株再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè)和PCR-Southern雜交分析，確定獲得4株轉(zhuǎn)Bt基因大蔥。 5.外源基因整合的多樣性。經(jīng)對(duì)gus基因表達(dá)的愈傷組織再生的256株再生苗進(jìn)行PCR分析，5株檢測(cè)到了gus基因，其中4株中含Bt基因。這表明在轉(zhuǎn)化過(guò)程中T-