酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品中的應(yīng)用

1、酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品檢測中的應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法在乳制品檢測中的應(yīng)用摘要:簡單介紹了酶聯(lián)免疚吸附法（ELISA）并且就其在乳制品檢測中的應(yīng)用進行了較詳細的評述主要包ELISA用于乳制品中的免疫球蛋白、乳鐵蛋白、微生物及其他成分的測定。關(guān)健詞：關(guān)健詞：酶聯(lián)免疫吸附法，乳制品，檢測Abstract:Theenzymelinkedimmunosbentassay(ELISA)wereintroducedbrieflyapplicationof

2、ELISAinmilkproductsanalysiswerealsostudiedincludingthedeterminationofimmunoglobulinlaotoferrinmicroganismaswellastheothercomponents.Keywds:ELISAmilkproductsdetermination1引言引言我國的食品安全問題已不再單純的是一般的質(zhì)量問題，食品自然甚至人為地污染日趨多樣化和復(fù)雜化，緊

3、抓食品安全控制成為了關(guān)系國計民生的大事，人民和政府的高度重視迫使食品科技不斷增加新的檢驗項目，特別是隨著生活質(zhì)量的提高，人們對于乳制品的需求越來越大，乳制品的安全檢測問題也就越發(fā)突出。利用新的科技手段不斷提高檢驗水平、質(zhì)量和效率。現(xiàn)今，食品安全檢測正朝著快速、靈敏、簡便的方向發(fā)展。酶聯(lián)免疫技術(shù)正是迎合了這一方向而被越來越多地應(yīng)用于乳制品檢驗領(lǐng)域的。2酶聯(lián)免疫吸附法的概述酶聯(lián)免疫吸附法的概述酶聯(lián)免疫吸附法(EnzymeLinkedImmu

4、nesbentAssay簡稱ELISA)又稱酶標法是在20世紀60年代在免疫熒光和組織化學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，1966年Nakane和Avrameas首先用酶標記抗體在普通光學(xué)顯微鏡下定位抗原。1971年Engvall和Perlman以及Weeman和Schuurs仿照放射免疫測定法(RIA)的競爭性測定原理使酶標抗原與待測標本中的未標記的抗原競爭結(jié)合一定量的抗體然后分離游離的和結(jié)合的標記抗原測定酶活性即可得到待測抗原量。次年E

5、ngvall等改用酶標記免疫球蛋白提高了標記效率避免了半抗原標記困難的問題也簡化了操作手續(xù)[1]。目前ELISA技術(shù)已廣泛應(yīng)用在臨床醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的檢測中但在食品安全領(lǐng)域中應(yīng)用相對較少。因此ELISA在食品安全檢測中的應(yīng)用仍有待于進一步的深入研究。由于ELISA檢測技術(shù)特異性高、靈敏性強并且食品安全問題日益受到消費者、學(xué)術(shù)界和各級政府的密切關(guān)注所以ELISA在食品安全檢測中的研究和應(yīng)用也越來越多。本文主要對ELISA法原理、

6、分類及在乳制品檢測中的應(yīng)用進展進行了綜述希望能對ELISA在乳制品檢測中的發(fā)展起到一定的作用。3ELISA的測定原理和方法的測定原理和方法3.1ELISA的測定原理的測定原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記即利用聚苯乙烯微4.2檢測乳鐵蛋白檢測乳鐵蛋白乳鐵蛋白（Lactoferrin簡稱Lf)和免疫球蛋白Ig一樣也是體液中一種免疫因子具有許多生理活性?？咕驼{(diào)整腸胃徽生物類群的作用；刺激和強化鐵的吸收；控制鐵催化

7、的自由基形成反應(yīng)的抗氧化作用，以及抗病毒效應(yīng)等等。在嬰兒配方奶粉保健乳粉中，鐵蛋白是不可缺少的一種活性成分。張英華[7]等應(yīng)用ELISA檢測乳鐵蛋白的含量最小檢出量為0.5ngml，線性范圍0.8ngml~100ngml，與目前通常采用的高效液相色譜(HPLC)相比具有快速、簡便、可同時檢測幾十個甚至幾百個試樣的優(yōu)點。ng……109g4.3檢測乳制品中的殘留農(nóng)藥檢測乳制品中的殘留農(nóng)藥藥物殘留分析從20世紀50年代就開始應(yīng)用至今經(jīng)歷了氣相

8、色譜法、高效液相色譜法、高效薄層色譜法、超臨界流體色譜法、毛細管區(qū)域電泳法和免疫分析法。馮秀瓊[8]對1998年前的農(nóng)藥殘留分析技術(shù)的發(fā)展進行了概括BGevao等[9]對近年來農(nóng)藥殘留分析的主流方法進行了綜述。藥物殘留分析是復(fù)雜的混合物中痕量組分的分析技術(shù)既需要精細的微量操作手段又需要高靈敏度的痕量檢測技術(shù)難度大、儀器化程度和分析成本高為藥物殘留分析帶來一定難度。隨著科技的發(fā)展更多的新技術(shù)和方法也將應(yīng)用于生產(chǎn)實踐如生物傳感器方法和熒光免

9、疫法納米科技、遠紅外和中紅外也將應(yīng)用于藥物殘留的檢測中。但所有的這些方法都需要有精密的大型儀器只能適合于中心實驗室或作為確證。高敏感性的快速檢測方法和試劑盒則成為保障無殘留的最重要的手段。因此在生產(chǎn)中趨向研究更為靈敏、準確、簡便、快速的檢測方法如ELISA檢測試劑盒[10]。王升吉等[11]論述了免疫分析法在農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用及前景。農(nóng)藥屬于小分子物質(zhì)是一種半抗原無免疫原性。所以檢測時首先選用競爭法檢測農(nóng)藥含量?；前芳捌溲苌锸浅Ｓ玫?/p>

10、廣譜抗菌獸藥廣泛應(yīng)用于乳牛傳染病的預(yù)防和治療。含磺胺及其衍生物的乳制品能影響核酸的合成破壞機體正常菌群生態(tài)平衡對人體健康會產(chǎn)生不良影響。吳定以牛血清蛋白和卵蛋白兩種不同的載體包被抗原建立牛乳中磺胺甲基嘧啶的ELISA測定。Thomson等[12]也應(yīng)用ELISA檢測牛乳中磺胺噬唑殘留量。4.4檢測乳制品中的微生物檢測乳制品中的微生物微生物檢測通常以分離培養(yǎng)、生化試驗及血清學(xué)試驗來進行判定其步驟煩瑣工作量大時間長(67d)而應(yīng)用ELISA

11、檢鍘微生物的優(yōu)點正受到人們越來越多的關(guān)注。乳制品的營養(yǎng)成分很豐富非常適合多種類群微生物的生長和繁殖。沙門氏菌是引起細菌性食物中毒的主要致病菌之一乳制品的微物檢驗必須包括沙門氏菌這一項。文其乙等[13](1996年)實驗應(yīng)用直接ELISA方法對500份蛋品檢測表明方法可靠且陽性率比國標方法高經(jīng)用生化實驗進一步驗證確認國標方法存在一定的漏檢。目前多采用制備單克隆抗體的ELISA方法進行檢測。有報道稱其最低檢測量可達500cfug僅需22h并

12、實現(xiàn)了以ELISA技術(shù)為基礎(chǔ)的全自動檢測[14]。田銀芳等[15]建立了沙門氏菌的直接ELISA方法檢測350份鮮牛奶樣品中的沙門氏菌。作者指出直接ELISA的敏感度和特異性都達到滿意的效果且分析時間大大縮短僅需要23d。另外乳制品中的霉菌也可以應(yīng)用ELISA檢測。例如Tsai等[16]就應(yīng)用ELISA檢測奶酪和酸牛奶中常見的青霉、毛霉和曲霉等。4.5檢測乳制品中的毒素檢測乳制品中的毒素黃曲霉毒素是一種致毒性和致癌性很強的毒素各國都嚴格