自身抗體的檢測

1、自身抗體的檢測 及應(yīng)用,,鄂爾多斯市中心醫(yī)院檢驗科 曹青鳳 2012.9.19,抗核抗體（ANA）的檢測與臨床應(yīng)用,抗核抗體的定義 傳統(tǒng)定義：針對細胞核成分抗原總稱。 廣義定義：針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身

2、抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成份，而是指核質(zhì)和核蛋白的總稱。,ANA測定原理和方法：,間接免疫熒光法（IIF):現(xiàn)多以Hep-2細胞（人喉癌上皮細胞）為底物（Ag)，其以核質(zhì)豐富而極大地提高了ANA檢測的陽性率和滴度。 是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗。 我們實驗室采用歐蒙熒光檢測系統(tǒng)，將1:100作為血清起始稀釋度，所以如果是低滴度的1:100陽性，只能視為一個臨界可疑值，臨床意義不大。ANA作為自身免疫性結(jié)締

3、組織病的篩選試驗必須強調(diào)高滴度。,ANA的靶抗原分布,整個細胞，包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂周期蛋白等。,ANA檢測的臨床意義,ANA可見于多種自身免疫性疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織疾病的診斷，病情判斷和療效觀察的指標(biāo),已證實ANA對很多自身免疫性疾病有診斷價值。ANA的靶抗原為細胞核內(nèi)的不同生化成份，包括核酸、細胞核蛋白和核糖體蛋白。在不同疾病中，特別是風(fēng)濕性疾病，其抗體譜有一定的特意性。在炎癥性風(fēng)濕病中ANA陽

4、性率在20%-100%之間，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中ANA陽性率最低，為20%-40%。所以，檢測ANA對于不同類型風(fēng)濕病意義重大。,⑴ SLE活動性：占95%-100%， 非活動性：占80%-100%。 （2）藥物誘導(dǎo)的SLE：占100%。 （3）混合性結(jié)締組織疾?。赫?00%。 （4）其它風(fēng)濕性疾病：占20%-50%

5、 （5）進行性系統(tǒng)硬化癥：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥綜合征：占70%-80%。 （8）慢性活動性肝炎：占30%-40%。 （9）潰瘍性結(jié)腸炎：占26%。,常見疾病,其它,還可見于： 非結(jié)締組織疾病中也可出現(xiàn)陽性；正常人（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型；高滴度ANA則高度提示自身

6、免疫性疾病。,ANA（＋）的原因,風(fēng)濕性疾病SLE多發(fā)性肌炎干燥綜合征硬皮病血管炎RA正常的健康人女性＞男性，出現(xiàn)率隨年齡而增加風(fēng)濕性疾病患者親屬？孕婦,藥物誘導(dǎo)慢性肝臟疾病慢性肺部疾病慢性感染血液系統(tǒng)異常惡性腫瘤,SLE患者使用IIF法測定ANA陰性的一些解釋,技術(shù)方面臨床方面經(jīng)皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療。終末期腎病。隱蔽ANA：與循環(huán)中免疫復(fù)合物結(jié)合，沉積于組織。由于大量蛋白尿而從腎臟丟失。,A

7、NA的熒光染色型別,細胞核：核均質(zhì)型（DNA、組蛋白和核小體等） 核顆粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白） 核膜型（板層素、gp120等） 核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纖維蛋白等） 核漿點型（著絲點、核多點及核少點型）細胞漿：胞漿顆粒型（線粒體、Jo-1、核糖體等）胞漿纖維型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌動蛋白等分裂期細胞陽性：紡垂體、中間體、中心體等,根據(jù)產(chǎn)生的熒光模

8、型、靶抗原的分布部位分類如下：,ANA篩查的方法,間接免疫熒光法（IIF）基質(zhì)組合為：HEP-2細胞 + 靈長類肝（猴）,核顆粒型：核粗顆粒型,抗核抗體染色類型 核仁型（nucleolar）,均質(zhì)性 （ homogeneous ）,ANA的 熒光類型,ANA試驗的結(jié)果中一般會報告其分型，這些分型可能與某一特定的抗原反應(yīng)活性相關(guān)。,抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）的檢測與臨床應(yīng)用,檢測：測定抗ds-DNA以血鞭毛蟲屬的綠螢短膜蟲

9、為靶抗原基質(zhì)，可聯(lián)合使用HEp-2細胞及靈長類肝組織檢測。 自身抗原：位于DNA脫氧核糖磷酸框架上。,抗dsDNA抗體,熒光模式：綠蠅短膜蟲：動基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強的熒光。Hep-2細胞：細胞核的均質(zhì)型熒光。,臨床應(yīng)用,抗雙鏈DNA抗體（ds-DNA）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，其陽性率因檢測方法而異，在40-90%。但抗ds-DNA陰性并不能排除患有SLE的可能性?？筪s-DNA抗體具有預(yù)測價值，85%的出現(xiàn)抗ds-DNA

10、抗體的健康人在五年內(nèi)發(fā)展為SLE。已證實抗ds-DNA抗體參與SLE的病理過程，在疾病形成過程中，抗ds-DNA和其抗體形成的免疫復(fù)合物沉積在皮下毛細血管、腎和其他器官內(nèi)，激活補體系統(tǒng)，從而導(dǎo)致組織損傷。,抗體水平與疾病活動度相關(guān)，隨著疾病活動的控制，抗ds-DNA抗體滴度可以下降或消失。,ANA譜3檢測及臨床應(yīng)用,抗RNP/Sm抗體,熒光模式：Hep-2片：細胞核粗顆粒，核仁陰性。肝組織切片：同上。熒光法不能區(qū)分抗RNP和抗體S

11、m。,抗RNP/Sm抗體,自身抗原：抗原RNP和Sm屬于一組小核糖核蛋白（snRNP），由低分子量的RNA和多種蛋白質(zhì)組成，RNA中尿苷（U-RNA）含量較高。臨床意義：高滴度的抗RNP抗體為 混合結(jié)締組織病（MCTD）的特征，發(fā)生率為95~100%。也可出現(xiàn)于SLE，但總是與抗Sm抗體同時出現(xiàn)?？筍m抗體對SLE具有高度特異性，發(fā)生率為20~40%。,抗SSA／SSB抗體,熒光模式Hep-2片：細胞核呈細顆粒熒光，核仁不發(fā)光。肝

12、組織片：細顆粒熒光。,抗SSA／SSB抗體,自身抗原：SSA抗原是一個小核糖核蛋白，由一個RNA分子和兩種不同的蛋白質(zhì)組成。蛋白質(zhì)的分子量為52KD和60KD?？贵w直接針對蛋白質(zhì)的抗原決定簇。SSB抗原是分子量為48kD的磷酸化蛋白。臨床意義；最常見于干燥綜合征（SS）,也見于SLE、原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC），偶見于慢活肝。抗SSA抗體在新生兒紅斑狼瘡的發(fā)生率幾乎為100%。,核仁陽性(Nucleolar),核仁熒光增強，核漿均質(zhì)

13、型---Scl-70抗體。 核仁均質(zhì)型---PM-Scl及其他抗原抗體。核仁細顆粒型---原纖維蛋白抗體。核仁粗顆粒型---RNA多聚酶-1抗體。,抗Scl-70抗體,熒光模式：Hep-2片：細胞核幾乎均質(zhì)的熒光，核仁熒光加強而且也為均質(zhì)型，胞漿無熒光。肝組織片；細胞核顆?；蚓|(zhì)型熒光，常見到細胞核熒光。,,抗Scl-70抗體,自身抗原：為DNA拓撲異構(gòu)酶1，分子量為100KD。在DNA雙鏈的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄中起作用。臨床意義：

14、25~70%的系統(tǒng)性硬化癥（PSS）彌漫型患者陽性，局限型硬皮病患者陰性。,細胞漿陽性,胞漿均質(zhì)型---抗核糖體抗體 細顆粒---抗Jo-1抗體 胞漿顆粒型 粗顆粒---AMA抗體 滴狀點狀---溶酶體抗體 核周顆粒--高爾基體抗體胞漿纖維型

15、 細纖維---波形蛋白抗體 環(huán)狀纖維---原肌球蛋白抗體 針狀纖維---肌動蛋白抗體,,,抗核糖體抗體,熒光模式：Hep-2：胞漿細顆粒到均質(zhì)狀、非常致密的熒光 。肝組織片：島狀熒光。臨床意義：SLE的特異性抗體，與精神癥狀有關(guān)。,,抗Jo-1抗體,熒光模式：Hep-2：胞漿顆粒到細塊狀熒光。肝組織片：

16、胞漿中弱熒光。自身抗原：組氨酰tRNA合成酶。臨床意義：見于PM，發(fā)生率25~35%。,,抗線粒體抗體,熒光模式：Hep-2：胞漿內(nèi)粗的顆粒型熒光。大鼠腎組織切片：腎小管明顯熒光，腎小球熒光較弱。,,抗線粒體抗體,自身抗原：位于真核細胞線粒體膜的內(nèi)面。線粒體自身抗原為2-氧酸脫氫酶復(fù)合體的亞單位，為一組自身抗原，其中與PBC有關(guān)的包括：（1）丙酮酸脫氫酶復(fù)合體（PDC）（2）支鏈2-氧酸脫氫酶復(fù)合體（BCOADC）（3）a

17、-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體（OGDC）,抗線粒體抗體,臨床意義：AMA-M2對PBC具有診斷意義。AMA亞型與疾病的相關(guān)性：AMA-1：梅毒、干燥綜合征AMA-2：PBCAMA-3：藥物性紅斑狼瘡AMA-4：PBC與AIH重疊AMA-5：SLE、自身免疫性溶血性貧血AMA-6：異煙肼引起的藥物性肝炎AMA-7：AIHAMA-8：AIH、閉塞性血栓性血管炎AMA -9：藥物性肝炎AMA-10：SLE,分裂期細胞陽性,染色

18、體陽性---染色體相關(guān)抗體，相關(guān)疾?。考忓N體纖維陽性---紡錘體纖維抗體，如燕麥細胞型支氣管肺癌中間體陽性---中間體抗體，相關(guān)疾??？細胞兩極陽性---中心?？贵w，相關(guān)疾??？著絲點陽性---抗著絲點抗體,抗著絲點抗體(ACA),熒光模式：Hep-2：細胞核細的、相同大小的顆粒熒光，分裂期顆粒熒光帶狀位于細胞中間。肝組織片：分布于細胞核的10~20個顆粒，熒光弱，易被忽略。,,抗著絲點抗體,自身抗原：著絲粒中的三種不同的蛋白質(zhì)

19、：著絲點蛋白A、B、C，主要抗原為著絲點蛋白B。臨床意義：對進行性系統(tǒng)性硬化癥亞型（CREST綜合征）有診斷意義。陽性率80~95%。還可見于PBC、SS等。,器官/組織特異性自身抗體,抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）抗平滑肌抗體抗角蛋白抗體抗肝腎微粒體抗體抗肝細胞膜抗原抗體抗可溶性肝抗原抗體抗肝特異性蛋白抗體,抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）cANCA,熒光模式：猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。甲醛固定的中性粒

20、細胞：胞漿內(nèi)粗大到細的熒光顆粒。,,抗中性粒細胞胞漿抗體（胞漿型）,自身抗原：為絲氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。該靶抗原為可溶性蛋白，存在于正常中性粒細胞的嗜苯胺藍顆粒中。臨床意義：cANCA可見于多種系統(tǒng)性血管炎。主要見于Wengener’s肉芽腫，約占ANCA陽性率的80~95%。cANCA被認(rèn)為是活動性Wengener’s肉芽腫和微多動脈炎的特異和敏感的標(biāo)志性抗體。還見于Churg-Strauss綜合征。,抗中性粒細胞胞漿抗體

21、（核周型）pANCA,熒光模式：乙醇固定的中性粒細胞：細胞核周圍平滑的帶狀熒光，細胞核陰性。猴肝：肝血竇區(qū)粒細胞強熒光，而肝細胞陰性。,,抗中性粒細胞胞漿抗體（核周型）,自身抗原：主要抗原為髓過氧化物酶（MPO），其他抗原還有白細胞彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、溶菌酶及乳鐵蛋白等。臨床意義：見于多種系統(tǒng)性血管炎?？梢娪赪engener’s肉芽腫、微多動脈炎、Churg-Strauss綜合征、炎性腸病、自免肝、系統(tǒng)性風(fēng)濕?。≧A、SLE

22、、SS、PM/DM）。,抗平滑肌抗體（SMA）,熒光模式：大鼠胃組織，呈現(xiàn)肌膜、黏膜肌層和肌膜腺體間收縮纖維的明顯細胞漿熒光 。大鼠腎組織，腎小管細胞內(nèi)原纖維、腎小球膜細胞及血管肌層的熒光。,,抗平滑肌抗體（SMA）,自身抗原：主要的靶抗原為肌動蛋白，肌動蛋白可以單體（G-肌動蛋白）或聚合體（F-肌動蛋白）形式存在于微絲中， F-肌動蛋白自身抗原與自免肝關(guān)系密切，而G-肌動蛋白自身抗原則與酒精性肝硬化有關(guān)。臨床意義：見于自身免疫性

23、肝炎、PBC、酒精性肝硬化。,抗角蛋白抗體（AKA）,熒光模式：大鼠食管，僅限于上皮角質(zhì)層的較強的線性分層的均質(zhì)熒光。,,抗角蛋白抗體（AKA）,自身抗原：絲聚蛋白（filaggrin）為AKA的靶抗原。臨床意義：見于RA，陽性率36~59%，特異性95~99%。還是一個潛在的預(yù)后標(biāo)志，高抗體滴度可能預(yù)示著較嚴(yán)重的RA類型。,抗肝腎微粒體抗體（LKM）,有三種熒光模式：LKM-1：肝細胞胞漿明顯熒光，呈細顆粒到均質(zhì)狀，腎臟近近端腎

24、小管有熒光。LKM-2：門靜脈周圍的肝組織熒光比其他部位強，腎臟近近端腎小管有熒光。 LKM-3：肝和腎均為陰性，靈長類睪丸間質(zhì)細胞熒光明顯。,,抗肝腎微粒體抗體（LKM）,自身抗原：LKM-1：細胞色素P450 Ⅱ D6，為50KD蛋白。LKM-2：細胞色素P450同工酶，藥物替尼酸的結(jié)合部位LKM-3：UDP葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶，為55KD蛋白。臨床意義：自免肝按血清學(xué)分型可分為三型Ⅰ型：出現(xiàn)ANA、SMA、肝細胞膜抗體