自身抗體檢測在肺癌診斷與篩查中的作用.pdf

1、目的：肺癌的發(fā)病率和死亡率居高不下。此外一些不健康的飲食生活習(xí)慣、外界大氣環(huán)境的污染、職業(yè)粉塵及化學(xué)元素的接觸等危險因素及煙草行業(yè)的流行帶給我們的影響，都促成著肺癌的發(fā)生與形成，時刻威脅著人類的健康。由于肺癌的惡性程度較高，且在疾病早期缺乏特異性的臨床癥狀，不能夠做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而使得病情延誤，大部分患者確診肺癌時已處于晚期階段，僅以姑息對癥治療為主，從而大大縮短了生存期。因此，肺癌的診斷，甚至是早期篩查診斷就顯得尤為重要，為延長

2、患者生存時間、改善患者生活質(zhì)量提供了重要前提。
　　病理學(xué)診斷仍是診斷肺癌的金標(biāo)準(zhǔn)。低劑量CT是目前主要的肺癌篩查手段，但由于其過高的假陽性率、射線輻射效應(yīng)、過度診斷及高昂的檢查費用等一系列問題，能否使患者真正受益還存在爭議。近年來，血清肺癌自身抗體的檢測手段在肺癌的診斷與篩查中顯示出較好的敏感性和特異性，其簡便、無創(chuàng)、便于推廣的特點提高了受試者的依從性，為肺癌的診斷與篩查提供了新思路。
　　p53基因突變導(dǎo)致的p53蛋白失

3、活是癌癥產(chǎn)生的一個重要步驟。p53自身抗體通常針對發(fā)生突變的p53基因產(chǎn)物而產(chǎn)生。PGP9.5是表達(dá)在神經(jīng)組織中的一種泛素水解酶，在原發(fā)性肺癌和肺癌細(xì)胞系中有大量表達(dá)。SOX2是一個轉(zhuǎn)錄因子，誘導(dǎo)腫瘤癌信號EGFR及BCL2L1，促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、存活。GAGE7屬于腫瘤/睪丸抗原，只表達(dá)于惡性腫瘤和睪丸組織，具有抗細(xì)胞凋亡活性。GBU4-5屬于ATP結(jié)合RNA解旋酶，在癌變過程中發(fā)揮重要作用，同時有腫瘤特異性和免疫原性。MAGE A

4、1屬人黑色素瘤抗原家族，只表達(dá)于惡性腫瘤和睪丸組織，可能與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和癌癥的轉(zhuǎn)化或進(jìn)展有關(guān)。CAGE屬于DEAD box解旋酶家族，它的表達(dá)量與細(xì)胞周期有關(guān)，在癌細(xì)胞中激活ERK和p38蛋白并增加腫瘤細(xì)胞的擴散。
　　本文收集了不同類型患者的血清標(biāo)本，并應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）分組進(jìn)行血清七種自身抗體（p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）水平的檢測，觀察此檢測方法對肺癌診斷與篩查

5、的靈敏度和特異度，并對比組間抗體水平的差異性，探討肺癌自身抗體檢測方法在肺癌診斷與篩查中的作用。
　　方法：
　　納入2016年11月-2017年2月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院的患者共140例，經(jīng)病理學(xué)檢查明確組織分型及TNM分期的肺癌，且排除其它臟器惡性腫瘤者88例，設(shè)為肺癌組，經(jīng)影像學(xué)或病理學(xué)檢查排除肺癌及其它臟器惡性腫瘤者47例（包括良性肺部疾病患者34例，健康受試者13例），設(shè)為對照組，經(jīng)病理證實為血管免疫母性T細(xì)胞

6、淋巴瘤患者1例、錯構(gòu)瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。
　　全血采集后經(jīng)過離心收集血清標(biāo)本，并對其進(jìn)行分組、編號，用ELISA方法對血清七種自身抗體進(jìn)行檢測：本實驗采用的試劑盒將純化的七個抗原包被到固相板表面。向包被抗原的微孔中分別加入稀釋好的血清樣本，經(jīng)孵育使血清樣本中的自身抗體與固相載體上的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。洗掉沒有結(jié)合的樣本，加入酶標(biāo)記抗人IgG抗體（酶結(jié)合物）。第二次孵育使酶標(biāo)記抗人IgG抗體與吸附到固相載體上的

7、自身抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗掉沒有結(jié)合的酶標(biāo)記抗人IgG抗體，加入顯色劑底物反應(yīng)后用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定其吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出自身抗體的相對濃度，并根據(jù)“陽性判斷值”對檢測的抗體濃度做出“陰性”、“陽性”的結(jié)果判斷，七種自身抗體的正常上限值如下：p53：13.1U/ml；PGP9.5：11.1U/ml；SOX2：10.3U/ml；GAGE7：14.4U/ml；GBU4-5：7.0U/ml；MAGEA1：

8、11.9U/ml；CAGE：7.2U/ml。（注：本數(shù)據(jù)經(jīng)過2008例大樣本多中心臨床試驗驗證），從而得出此方法的靈敏度和特異度，并對比組間檢測陽性率及組間抗體水平的差異性。非正態(tài)計量資料組間差異采用Mann-Whitney U檢驗。組間檢測陽性率的比較采用卡方檢驗。所有檢驗都為雙側(cè)檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.研究對象的臨床特征
　　肺癌組納入88例肺癌患者作為研究對象。其中男性患者5

9、6例，占63.6％，年齡范圍分布在35-80歲，平均年齡為61.2±9.4歲，年齡≥60歲者55例，占62.5%；腺癌患者54例，占61.4%，鱗癌患者18例，占20.4%，其它類型肺癌患者16例，占18.2%；有吸煙史者42例，占47.7%；Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者53例，占60.2%，Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者35例，占39.8%。
　　良性肺部疾病組納入34例良性肺部疾病患者作為研究對象。其中男性患者18例，占52.9%；年齡范圍分布在25-

10、86歲，平均年齡為54.8±16.2歲，年齡≥60歲者11例，占32.4%；有吸煙史者10例，占29.4%；肺炎患者16例，占47.0%，肺結(jié)核患者9例，占26.5%，慢性阻塞性肺疾病患者5例，占14.7%，其它類型患者4例，占11.8%。
　　健康人群組納入13例健康受試者作為研究對象。其中男性患者6例，占46.2%；年齡范圍分布在39-76歲，平均年齡為56.5±11.5歲，年齡≥60歲者4例，占30.8%。
　　另有血

11、管免疫母性T細(xì)胞淋巴瘤患者1例、錯構(gòu)瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。
　　2.肺癌組與對照組七種自身抗體檢測陽性率的比較：
　　肺癌組的p53和 GBU4-5抗體檢測的陽性率均高于對照組（p53:17.0%vs4.3%，P<0.05；GBU4-5:15.9%vs0%，P<0.05）。其余五種自身抗體在肺癌組與對照組之間的檢測陽性率均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　3.七種自身抗體單獨檢測對肺癌篩查的靈敏度

12、、特異度、診斷符合率、正確指數(shù)：
　　靈敏度：9.1%-17%；特異度：89.4%-100%；診斷符合率：38.5%-45.2%；正確指數(shù)：0.03-0.16。
　　4.自身抗體聯(lián)合檢測對肺癌篩查的靈敏度、特異度、診斷符合率、正確指數(shù)：
　　p53與GBU4-5抗體聯(lián)合檢測的靈敏度為27.2%，特異度為95.7%，診斷符合率為51.1%，正確指數(shù)為0.23；p53、GBU4-5與MAGEA1抗體聯(lián)合檢測的靈敏度為34.

13、1%，特異度為91.5%，診斷符合率為54.1%，正確指數(shù)為0.26；七種自身抗體聯(lián)合檢測的靈敏度為46.6%，特異度為70.2%，診斷符合率為54.8%，正確指數(shù)為0.17。
　　5.七種抗體聯(lián)合檢測對不同類型肺癌篩查的靈敏度及特異度：
　　七種抗體聯(lián)合檢測對肺腺癌診斷的靈敏度為35.2%，特異度為70.2%；對肺鱗癌診斷的靈敏度為72.2%，特異度為70.2%。
　　6.肺癌組與對照組七種自身抗體表達(dá)水平的比較：<

14、br>　　肺癌組p53抗體表達(dá)水平高于對照組（2.30（0.83,7.18） vs1.60（0.20,2.80），P<0.05）。其余六種自身抗體在肺癌組與對照組之間的表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.不同病理類型肺癌與對照組七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　7.1.肺腺癌與肺鱗癌患者血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　肺鱗癌患者PGP9.5抗體表達(dá)水平高于肺腺癌患者（5.05（2.13,19.85）

15、vs2.45（1.60,3.73），P<0.05）。其余六種自身抗體在肺腺癌與肺鱗癌患者之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.2.肺腺癌患者與對照組血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　七種自身抗體在肺腺癌患者與對照組之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.3.肺鱗癌患者與對照組血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　肺鱗癌患者血清p53、PGP9.5、MAGEA1抗體的表達(dá)水平均

16、高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p53：2.95（1.63,19.70）vs1.60（0.20,2.80）， P<0.05；PGP9.5：5.05（2.13,19.85）vs2.60（1.90,4.00），P<0.05；MAGEA1：2.15（0.20,13.58）vs0.50（0.10,1.70），P<0.05）。其余四種自身抗體在肺鱗癌患者與對照組之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　8.Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者與Ⅲ、Ⅳ

17、期肺癌患者血清自身抗體表達(dá)水平的比較：
　?、?、Ⅳ期肺癌患者血清PGP9.5、GBU4-5、CAGE抗體的表達(dá)水平均高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（PGP9.5：3.10（2.30,18.10） vs2.30（1.55,3.75），P<0.05；GBU4-5：1.50（0.20,22.00）vs0.40（0.00,1.15）， P<0.05；CAGE：1.70（1.20,8.10）vs1.40（0.20,2.05），P<

18、0.05）。其余四種自身抗體在Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期患者之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.單一抗體檢測（p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）對肺癌篩查的特異度較高（89.4%-100%），靈敏度較低（9.1%-17.0%），尚不能滿足作為肺癌篩查的指標(biāo)。
　　2.兩個（p53與GBU4-5）或三個（p53、GBU4-5與MAGEA1）肺癌自身抗