自身抗體檢測(cè)在肺癌診斷與篩查中的作用.pdf

1、目的：肺癌的發(fā)病率和死亡率居高不下。此外一些不健康的飲食生活習(xí)慣、外界大氣環(huán)境的污染、職業(yè)粉塵及化學(xué)元素的接觸等危險(xiǎn)因素及煙草行業(yè)的流行帶給我們的影響，都促成著肺癌的發(fā)生與形成，時(shí)刻威脅著人類的健康。由于肺癌的惡性程度較高，且在疾病早期缺乏特異性的臨床癥狀，不能夠做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，從而使得病情延誤，大部分患者確診肺癌時(shí)已處于晚期階段，僅以姑息對(duì)癥治療為主，從而大大縮短了生存期。因此，肺癌的診斷，甚至是早期篩查診斷就顯得尤為重要，為延長(zhǎng)

2、患者生存時(shí)間、改善患者生活質(zhì)量提供了重要前提。
　　病理學(xué)診斷仍是診斷肺癌的金標(biāo)準(zhǔn)。低劑量CT是目前主要的肺癌篩查手段，但由于其過高的假陽(yáng)性率、射線輻射效應(yīng)、過度診斷及高昂的檢查費(fèi)用等一系列問題，能否使患者真正受益還存在爭(zhēng)議。近年來，血清肺癌自身抗體的檢測(cè)手段在肺癌的診斷與篩查中顯示出較好的敏感性和特異性，其簡(jiǎn)便、無創(chuàng)、便于推廣的特點(diǎn)提高了受試者的依從性，為肺癌的診斷與篩查提供了新思路。
　　p53基因突變導(dǎo)致的p53蛋白失

3、活是癌癥產(chǎn)生的一個(gè)重要步驟。p53自身抗體通常針對(duì)發(fā)生突變的p53基因產(chǎn)物而產(chǎn)生。PGP9.5是表達(dá)在神經(jīng)組織中的一種泛素水解酶，在原發(fā)性肺癌和肺癌細(xì)胞系中有大量表達(dá)。SOX2是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，誘導(dǎo)腫瘤癌信號(hào)EGFR及BCL2L1，促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖、存活。GAGE7屬于腫瘤/睪丸抗原，只表達(dá)于惡性腫瘤和睪丸組織，具有抗細(xì)胞凋亡活性。GBU4-5屬于ATP結(jié)合RNA解旋酶，在癌變過程中發(fā)揮重要作用，同時(shí)有腫瘤特異性和免疫原性。MAGE A

4、1屬人黑色素瘤抗原家族，只表達(dá)于惡性腫瘤和睪丸組織，可能與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和癌癥的轉(zhuǎn)化或進(jìn)展有關(guān)。CAGE屬于DEAD box解旋酶家族，它的表達(dá)量與細(xì)胞周期有關(guān)，在癌細(xì)胞中激活ERK和p38蛋白并增加腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散。
　　本文收集了不同類型患者的血清標(biāo)本，并應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）分組進(jìn)行血清七種自身抗體（p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）水平的檢測(cè)，觀察此檢測(cè)方法對(duì)肺癌診斷與篩查

5、的靈敏度和特異度，并對(duì)比組間抗體水平的差異性，探討肺癌自身抗體檢測(cè)方法在肺癌診斷與篩查中的作用。
　　方法：
　　納入2016年11月-2017年2月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院的患者共140例，經(jīng)病理學(xué)檢查明確組織分型及TNM分期的肺癌，且排除其它臟器惡性腫瘤者88例，設(shè)為肺癌組，經(jīng)影像學(xué)或病理學(xué)檢查排除肺癌及其它臟器惡性腫瘤者47例（包括良性肺部疾病患者34例，健康受試者13例），設(shè)為對(duì)照組，經(jīng)病理證實(shí)為血管免疫母性T細(xì)胞

6、淋巴瘤患者1例、錯(cuò)構(gòu)瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。
　　全血采集后經(jīng)過離心收集血清標(biāo)本，并對(duì)其進(jìn)行分組、編號(hào)，用ELISA方法對(duì)血清七種自身抗體進(jìn)行檢測(cè)：本實(shí)驗(yàn)采用的試劑盒將純化的七個(gè)抗原包被到固相板表面。向包被抗原的微孔中分別加入稀釋好的血清樣本，經(jīng)孵育使血清樣本中的自身抗體與固相載體上的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。洗掉沒有結(jié)合的樣本，加入酶標(biāo)記抗人IgG抗體（酶結(jié)合物）。第二次孵育使酶標(biāo)記抗人IgG抗體與吸附到固相載體上的

7、自身抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗掉沒有結(jié)合的酶標(biāo)記抗人IgG抗體，加入顯色劑底物反應(yīng)后用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出自身抗體的相對(duì)濃度，并根據(jù)“陽(yáng)性判斷值”對(duì)檢測(cè)的抗體濃度做出“陰性”、“陽(yáng)性”的結(jié)果判斷，七種自身抗體的正常上限值如下：p53：13.1U/ml；PGP9.5：11.1U/ml；SOX2：10.3U/ml；GAGE7：14.4U/ml；GBU4-5：7.0U/ml；MAGEA1：

8、11.9U/ml；CAGE：7.2U/ml。（注：本數(shù)據(jù)經(jīng)過2008例大樣本多中心臨床試驗(yàn)驗(yàn)證），從而得出此方法的靈敏度和特異度，并對(duì)比組間檢測(cè)陽(yáng)性率及組間抗體水平的差異性。非正態(tài)計(jì)量資料組間差異采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。組間檢測(cè)陽(yáng)性率的比較采用卡方檢驗(yàn)。所有檢驗(yàn)都為雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.研究對(duì)象的臨床特征
　　肺癌組納入88例肺癌患者作為研究對(duì)象。其中男性患者5

9、6例，占63.6％，年齡范圍分布在35-80歲，平均年齡為61.2±9.4歲，年齡≥60歲者55例，占62.5%；腺癌患者54例，占61.4%，鱗癌患者18例，占20.4%，其它類型肺癌患者16例，占18.2%；有吸煙史者42例，占47.7%；Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者53例，占60.2%，Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者35例，占39.8%。
　　良性肺部疾病組納入34例良性肺部疾病患者作為研究對(duì)象。其中男性患者18例，占52.9%；年齡范圍分布在25-

10、86歲，平均年齡為54.8±16.2歲，年齡≥60歲者11例，占32.4%；有吸煙史者10例，占29.4%；肺炎患者16例，占47.0%，肺結(jié)核患者9例，占26.5%，慢性阻塞性肺疾病患者5例，占14.7%，其它類型患者4例，占11.8%。
　　健康人群組納入13例健康受試者作為研究對(duì)象。其中男性患者6例，占46.2%；年齡范圍分布在39-76歲，平均年齡為56.5±11.5歲，年齡≥60歲者4例，占30.8%。
　　另有血

11、管免疫母性T細(xì)胞淋巴瘤患者1例、錯(cuò)構(gòu)瘤患者2例、畸胎瘤患者1例、肉瘤患者1例。
　　2.肺癌組與對(duì)照組七種自身抗體檢測(cè)陽(yáng)性率的比較：
　　肺癌組的p53和 GBU4-5抗體檢測(cè)的陽(yáng)性率均高于對(duì)照組（p53:17.0%vs4.3%，P<0.05；GBU4-5:15.9%vs0%，P<0.05）。其余五種自身抗體在肺癌組與對(duì)照組之間的檢測(cè)陽(yáng)性率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　3.七種自身抗體單獨(dú)檢測(cè)對(duì)肺癌篩查的靈敏度

12、、特異度、診斷符合率、正確指數(shù)：
　　靈敏度：9.1%-17%；特異度：89.4%-100%；診斷符合率：38.5%-45.2%；正確指數(shù)：0.03-0.16。
　　4.自身抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌篩查的靈敏度、特異度、診斷符合率、正確指數(shù)：
　　p53與GBU4-5抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為27.2%，特異度為95.7%，診斷符合率為51.1%，正確指數(shù)為0.23；p53、GBU4-5與MAGEA1抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為34.

13、1%，特異度為91.5%，診斷符合率為54.1%，正確指數(shù)為0.26；七種自身抗體聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度為46.6%，特異度為70.2%，診斷符合率為54.8%，正確指數(shù)為0.17。
　　5.七種抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)不同類型肺癌篩查的靈敏度及特異度：
　　七種抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺腺癌診斷的靈敏度為35.2%，特異度為70.2%；對(duì)肺鱗癌診斷的靈敏度為72.2%，特異度為70.2%。
　　6.肺癌組與對(duì)照組七種自身抗體表達(dá)水平的比較：<

14、br>　　肺癌組p53抗體表達(dá)水平高于對(duì)照組（2.30（0.83,7.18） vs1.60（0.20,2.80），P<0.05）。其余六種自身抗體在肺癌組與對(duì)照組之間的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.不同病理類型肺癌與對(duì)照組七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　7.1.肺腺癌與肺鱗癌患者血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　肺鱗癌患者PGP9.5抗體表達(dá)水平高于肺腺癌患者（5.05（2.13,19.85）

15、vs2.45（1.60,3.73），P<0.05）。其余六種自身抗體在肺腺癌與肺鱗癌患者之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.2.肺腺癌患者與對(duì)照組血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　七種自身抗體在肺腺癌患者與對(duì)照組之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　7.3.肺鱗癌患者與對(duì)照組血清七種自身抗體表達(dá)水平的比較：
　　肺鱗癌患者血清p53、PGP9.5、MAGEA1抗體的表達(dá)水平均

16、高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p53：2.95（1.63,19.70）vs1.60（0.20,2.80）， P<0.05；PGP9.5：5.05（2.13,19.85）vs2.60（1.90,4.00），P<0.05；MAGEA1：2.15（0.20,13.58）vs0.50（0.10,1.70），P<0.05）。其余四種自身抗體在肺鱗癌患者與對(duì)照組之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　8.Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者與Ⅲ、Ⅳ

17、期肺癌患者血清自身抗體表達(dá)水平的比較：
　?、?、Ⅳ期肺癌患者血清PGP9.5、GBU4-5、CAGE抗體的表達(dá)水平均高于Ⅰ、Ⅱ期肺癌患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（PGP9.5：3.10（2.30,18.10） vs2.30（1.55,3.75），P<0.05；GBU4-5：1.50（0.20,22.00）vs0.40（0.00,1.15）， P<0.05；CAGE：1.70（1.20,8.10）vs1.40（0.20,2.05），P<

18、0.05）。其余四種自身抗體在Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ、Ⅳ期患者之間的表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.單一抗體檢測(cè)（p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5、MAGEA1、CAGE）對(duì)肺癌篩查的特異度較高（89.4%-100%），靈敏度較低（9.1%-17.0%），尚不能滿足作為肺癌篩查的指標(biāo)。
　　2.兩個(gè)（p53與GBU4-5）或三個(gè)（p53、GBU4-5與MAGEA1）肺癌自身抗