大豆異黃酮對(duì)嶺南黃羽肉雞生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)的影響和抗氧化作用機(jī)制研究.pdf

1、本研究用大豆異黃酮SI處理離體培養(yǎng)嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞,研究大豆異黃酮SI對(duì)骨骼肌細(xì)胞的增殖和抗氧化作用的影響:研究金雀異黃酮(GEN)對(duì)骨骼肌細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、抗氧化酶活性和基因表達(dá)的影響;用H2O2/FeSO4氧化嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞造成氧化模型,研究在氧化環(huán)境中GEN和大豆異黃酮SI的抗氧化作用、對(duì)細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響及其對(duì)抗氧化酶基因表達(dá)的影響;在42日齡嶺南黃羽肉公雞飼糧中添加不同濃度梯度的大豆異黃酮SI,研究大豆異黃酮SI對(duì)

2、嶺南黃羽肉公雞生長(zhǎng)性能、胴體指標(biāo)、肉品質(zhì)特性、血漿、肝臟和胸肌中生化指標(biāo)的影響以及胸肌中抗氧化酶基因表達(dá)的影響;采用2(大豆異黃酮SI添加)×2(魚(yú)油氧化處理)因子隨機(jī)分組設(shè)計(jì),在42日齡嶺南黃羽肉公雞新鮮魚(yú)油或氧化魚(yú)油飼糧中添加或不添加大豆異黃酮SI,研究在兩種魚(yú)油飼糧中添加大豆異黃酮SI對(duì)嶺南黃羽肉公雞生長(zhǎng)性能、胴體指標(biāo)、肉品質(zhì)特性、血漿、肝臟和胸肌中生化指標(biāo)的影響以及胸肌中抗氧化酶基因表達(dá)的影響;旨在探討大豆異黃酮對(duì)嶺南黃羽肉雞的

3、影響及其抗氧化作用機(jī)理,為大豆異黃酮作為一種抗氧化飼料添加劑在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 試驗(yàn)一:選用20日齡嶺南黃羽肉雞雞胚在無(wú)菌環(huán)境下分離腿部骨骼肌,經(jīng)過(guò)剪碎、膠原酶Ⅰ和胰蛋白酶消化,通過(guò)100目和200目篩過(guò)濾,濾液轉(zhuǎn)移到10ml離心管中1700rpm離心、清洗得到骨骼肌原代細(xì)胞,用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果將細(xì)胞液稀釋至5.0×105/ml,然后接種至培養(yǎng)瓶中,用完全培養(yǎng)基在二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),再經(jīng)0.2

4、5％胰蛋白酶消化傳代,采用差速貼壁法得到骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,以5.0×105/ml濃度接種至96孔板和24孔板,試驗(yàn)分5組,各組無(wú)血清培養(yǎng)液中分別添加0、12.5、25、50、75和100μmol/L的大豆異黃酮SI(所用大豆異黃酮為廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所研制產(chǎn)品,純度為98.5％以上),大豆異黃酮預(yù)先溶解于二甲基亞砜中,并保持各組中二甲基亞砜濃度一致,所有培養(yǎng)液中均添加80μmol/LH2O2/FeSO4進(jìn)行氧化處理建立氧化模型,每組

5、6個(gè)重復(fù)(孔),研究了大豆異黃酮對(duì)肉雞骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖和抗氧化作用的影響,試驗(yàn)觀察了骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)大豆異黃酮處理后的形態(tài)變化和采用MTT法測(cè)定骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖情況,結(jié)果表明,在氧化環(huán)境中,大豆異黃酮可減少骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞死亡,而且添加大豆異黃酮均促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖(p＜0.01),各大豆異黃酮處理組骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞經(jīng)MTT染色和SDS處理后的吸光度分別較對(duì)照組提高45.90％(P＜0.01)、58.64％(P＜0.01)、60

6、.21％(P＜0.01)、46.42％(P＜0.01)和25.48％(P＜0.05)。添加25,50,75和100μmol/LSI使細(xì)胞培養(yǎng)上清液中T-SOD活性分別提高17.02％(P＜0.01),13.00％(P＜0.05),13.26％(P＜0.05)和11.89％(P＜0.05),添加25μmol/L SI提高GSHPx活性90.68％(p＜0.05),75和100μmol/L SI處理組CAT活性分別比對(duì)照組提高49.17％(

7、P＜0.01)和49.13％(P＜0.05),SI有提高細(xì)胞上清液中T-AOC的趨勢(shì)(P＞0.05),添加75和100μmol/L大豆異黃酮處理顯著降低細(xì)胞CK的分泌(P＜0.05)。總之,大豆異黃酮SI能促進(jìn)骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在氧化環(huán)境中的增殖,提高骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的抗氧化能力。
　　 試驗(yàn)二:為研究大豆異黃酮主要成分金雀異黃酮(GEN)對(duì)離體培養(yǎng)的雞骨骼肌細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化、抗氧化酶活性和基因表達(dá)的影響,嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞接受不同

8、濃度的GEN處理48h后,測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶和CAT活性以及丙二醛含量,應(yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定GEN對(duì)骨骼肌細(xì)胞中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶基岡表達(dá)的影響。結(jié)果表明,與空白對(duì)照組相比,添加GEN組骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MDA含量顯著降低(p＜0.05),添加1μmol/L和161μmol/L GEN顯著提高了雞骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SOD活性(p＜0.05),添加4μmol/L和16μmol

9、/L GEN顯著提高了GSHPx活性(p＜0.05),細(xì)胞培養(yǎng)液中添加GEN具有提高GSHPx mRNA拷貝數(shù)趨勢(shì),但各組間無(wú)顯著差異(p＞0.05)。由此可見(jiàn),添加金雀異黃酮能抑制雞骨骼肌細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化,增強(qiáng)雞骨骼肌細(xì)胞的抗氧化能力。
　　 試驗(yàn)三:嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞以5.0×105/ml濃度接種至6孔板和24孔板,試驗(yàn)分10組,組1為正?？瞻讓?duì)照組,未添加H2O2/FeSO4和大豆異黃酮,組2為氧化細(xì)胞組,僅添加H2O

10、2/FeSO4但未添加大豆異黃酮,組3、4、5、6在均添加50μmol/LH2O2/FeSO4基礎(chǔ)上分別10、20、40、80μmol/L的GEN,組7、8、9、10在均添加50μmol/L H2O2/FeSO4基礎(chǔ)上分別10、20、40、80μmol/L的SI,GEN和SI預(yù)先溶解于二甲基亞砜中,并保持各組中二甲基亞砜濃度一致,每組6個(gè)重復(fù)(孔),研究了GEN和SI對(duì)嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞抗氧化狀況、細(xì)胞膜流動(dòng)性和骨骼肌細(xì)胞中CAT和

11、GSHPx mRNA表達(dá)量的影響。結(jié)果表明,H2O2/FeSO4氧化組細(xì)胞培養(yǎng)上清液MDA含量略高于其它各組(p＜0.1),T-SOD活性最低,極顯著低于其它各組(p＜0.01),GSttPx活性也最低,極顯著低于添加20、40、80μmol/L GEN組和添加20、80μmol/L SI組(p＜0.01)。添加40、80μmol/L SI組骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液CK活性極顯著低于除80μmol/L GEN組的其它各組(p＜0.01),添

12、加80μmol/L GEN組CK活性顯著低于空白對(duì)照組和H2O2/FeSO4氧化組(p＜0.05)。H2Oz/FeSO4氧化組LDH活性極顯著高于空白對(duì)照組、40μmol/L GEN組和添加SI的各組(p＜0.01)。嶺南黃羽肉雞骨骼肌細(xì)胞經(jīng)H2O2/FeSO4處理后,細(xì)胞膜熒光偏振值p和微粘度η極顯著增加(P＜0.01)。添加80μmol/L GEN或者SI組細(xì)胞膜p值極顯著低于H2O2/FeSO4氧化處理組(P＜0.01),但與正常

13、未氧化組細(xì)胞無(wú)顯著差異(p＞0.05)。與H2O2/FeSO4氧化處理組比較,添加各水平GEN或者SI均極顯著降低了細(xì)胞膜η值(P＜0.01),下降幅度以80μmol/L濃度組最大,分別為87.53％和89.51％。各異黃酮水平和種類之間無(wú)顯著差異(p＞0.05)。添加20μmol/L SI或者20μmol/L GEN組的GSHPx基因表達(dá)水平極顯著高于氧化細(xì)胞組(P＜0.01),提示大豆異黃酮SI和GEN具有促使離體培養(yǎng)雞骨骼肌細(xì)胞的

14、GSHPx基因表達(dá)的作用。總體上,GEN和SI能夠從分子水平調(diào)控抗氧化酶活性,提高骨骼肌細(xì)胞在氧化環(huán)境中的抗氧化能力,改善細(xì)胞膜流動(dòng)性,抵抗氧化損傷,SI的抗氧化作用效果較GEN更強(qiáng)。
　　 試驗(yàn)四:選用42日齡體重約1.03kg健康、發(fā)育良好的嶺南快大黃羽肉雞公雞,根據(jù)體重隨機(jī)分為5個(gè)處理,每處理均6個(gè)重復(fù)(欄),每重復(fù)50只雞,試驗(yàn)采用玉米-大豆?jié)饪s蛋白型基礎(chǔ)飼糧,各處理飼糧中分別添加0、10、20、40、80mg/kg大豆

15、異黃酮SI,其他營(yíng)養(yǎng)成分一致,試驗(yàn)雞自由采食粉料、自由飲水,地面平養(yǎng)。試驗(yàn)期21日。研究不同濃度SI對(duì)黃羽肉雞生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)和機(jī)體抗氧化性能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明:添加大豆異黃酮SI增強(qiáng)肉雞抗氧化能力,改善生長(zhǎng)性能和新鮮肉與肉品貯藏過(guò)程中的肉品質(zhì),對(duì)延長(zhǎng)雞肉的貨架期十分有利,綜合考慮生產(chǎn)性能、肉品質(zhì)和各項(xiàng)生化指標(biāo)得出,43-63日齡階段嶺南黃羽肉雞飼糧中添加20mg/kg大豆異黃酮SI較適宜。
　　 試驗(yàn)五：選用42日齡健康、發(fā)

16、育良好的嶺南快大黃羽肉雞公雛作為試驗(yàn)雞,研究了在氧化魚(yú)油和新鮮魚(yú)油飼糧中添加SI對(duì)嶺南黃肉公雞生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)、肉品質(zhì)和抗氧化作用機(jī)制的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：魚(yú)油氧化處理對(duì)雞肉品質(zhì)和抗氧化狀況產(chǎn)生不利影響,在魚(yú)油飼糧中補(bǔ)充大豆異黃酮SI提高了肉雞抗氧化狀況和肌肉的抗氧化穩(wěn)定性,抵抗脂質(zhì)過(guò)氧化,保護(hù)肉雞胸肌肉免受氧化損失,補(bǔ)充大豆異黃酮SI能從分子水平促進(jìn)胸肌中GSHPx mRNA的表達(dá),間接發(fā)揮抗氧化效應(yīng)。
　　 以上5個(gè)試驗(yàn)結(jié)