JNK信號通路參與雌二醇減輕皮瓣缺血再灌注損傷的研究.pdf

1、目的：絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路是廣泛存在于真核細胞中的重要信號轉導途徑，可將細胞外信號逐級放大并傳導到細胞內(nèi)乃至細胞核，具有調(diào)控細胞周期和細胞內(nèi)基因表達的作用，參與多種細胞應答及病理變化過程。JNK信號通路是MAPK三大主要信號通路之一，研究提示JNK在生存信號、細胞死亡、腫瘤及糖尿病等過程均發(fā)揮作用。雌激素是一種天然的內(nèi)分泌激素，對機體的正常生理功能起重要調(diào)控作用。已有研究發(fā)現(xiàn)雌二醇（雌激素的主要形式）對動物心、腦、肝、

2、腎的缺血再灌注損傷具有保護作用。我們在先前的實驗中也已發(fā)現(xiàn)，雌二醇可減輕大鼠皮瓣的缺血再灌注損傷，但這種保護機制是否與JNK信號通路有關仍未知。
　　本文通過建立大鼠皮瓣缺血再灌注損傷模型，進一步驗證雌二醇對皮瓣缺血再灌注損傷的保護作用；通過測定各組大鼠皮瓣組織中JNK、p-JNK、MKP-5的表達情況，以闡明JNK信號通路參與雌二醇對皮瓣缺血再灌注損傷的保護作用。
　　方法：雄性Wistar大鼠40只，12～14周齡，大鼠

3、飼養(yǎng)及大鼠腹部皮瓣缺血再灌注損傷模型制作均在無特定病原菌級（SPF級）實驗室進行。大鼠隨機分4組，對照組（Ⅰ組）：皮瓣設計切取，分離皮瓣蒂部血管后原位縫合皮瓣；缺血再灌注組（Ⅱ組）：皮瓣設計及切取同對照組，蒂部血管分離后用無損傷顯微血管夾夾閉腹壁淺動靜脈，6h后取出血管夾，確認腹壁淺動脈血流恢復，原位縫合皮瓣；雌二醇組（Ⅲ組）：與Ⅱ組相同方法建立皮瓣模型，腹腔注射雌二醇；JNK抑制劑組（Ⅳ組）：與Ⅱ組相同方法建立皮瓣模型，腹腔注射JNK

4、抑制劑SP600125。術后觀察各組皮瓣一般情況；對皮瓣進行攝像，采用Image-Pro Plus.V6.0圖像分析系統(tǒng)計算皮瓣存活率；切取皮瓣組織進行組織學觀察；Western Blot法檢測皮瓣組織中JNK、p-JNK、及絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶-5（MKP-5）的表達情況。
　　結果：術后第7d，Ⅰ組皮瓣大部分存活，少有壞死，皮瓣質地柔軟、毛發(fā)生長好；Ⅱ組皮瓣壞死明顯，部分皮瓣存活，存活皮瓣質地變硬、毛發(fā)稀疏生長；Ⅲ、Ⅳ組皮

5、瓣壞死面積少，皮瓣毛發(fā)生長良好，存活皮瓣質地柔軟。Ⅲ、Ⅳ組皮瓣存活率顯著高于Ⅱ組（P<0.05）。皮瓣組織學檢查結果顯示：Ⅰ組皮瓣組織結構正常，未見組織明顯水腫，纖維組織排列整齊，白細胞少，血管壁完好；Ⅱ組組織結構破壞，水腫明顯，纖維組織連續(xù)性斷裂、排列凌亂，血管壁破壞嚴重、滲血及炎性細胞滲出明顯；與Ⅱ組相比，Ⅲ組、Ⅳ組皮瓣組織結構基本保持正常，纖維組織排列整齊，白細胞浸潤少，血管壁較完好，細胞變性、壞死現(xiàn)象少見。Western Blo

6、t結果顯示：缺血再灌注后Ⅱ組JNK的表達水平較Ⅰ組明顯上調(diào)，而Ⅲ組、Ⅳ組JNK的表達水平明顯低于Ⅱ組（P＜0.05）。JNK活化形式p-JNK的表達：Ⅱ組較Ⅰ組高（P＜0.05），Ⅲ組和Ⅳ組p-JNK蛋白水平顯著低于Ⅱ組（P＜0.05）。MKP-5的蛋白表達水平，四組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。這些結果提示缺血再灌注可使組織中JNK及p-JNK的表達上調(diào)，而雌二醇可抑制JNK及p-JNK的表達。
　　結論：
　　1.雌二