usp9x基因在三陰性乳腺癌化療耐藥中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　乳腺癌(Breast Cancer)是現(xiàn)今女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，作為一個(gè)特殊的乳腺癌亞型，三陰性乳腺癌(TNBC)侵襲力強(qiáng)、易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。尋找合適靶點(diǎn)提高TNBC的化療敏感性是其研究的關(guān)鍵。X染色體連鎖的泛素特異性蛋白酶9(usp9x)是一種編碼泛素特異性蛋白酶的基因，在包括TNBC在內(nèi)的多種腫瘤內(nèi)高表達(dá)，其編碼的去泛素化酶usp9x作為一種對(duì)蛋白泛素化起到逆向調(diào)節(jié)作用的重要調(diào)節(jié)因子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起了關(guān)鍵作

2、用，能調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，控制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及凋亡。隨著對(duì)泛素化酶usp9x研究的深入，其在腫瘤耐藥中的作用被逐漸提出。本研究的目的就是觀察usp9x在三陰性乳腺癌對(duì)順鉑耐藥性中的作用及其可能機(jī)制。
　　材料與方法：
　　本研究用順鉑處理MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三種乳腺癌細(xì)胞株，利用細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(CCK-8)檢測(cè)乳腺癌癌細(xì)胞系的細(xì)胞活力，細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（EdU試驗(yàn)）檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞

3、系的增殖情況，蛋白免疫印跡技術(shù)(Western-blot)內(nèi)usp9x蛋白的表達(dá)情況。用usp9x抑制劑WP1130抑制乳腺癌細(xì)胞株內(nèi)usp9x的活性，研究單純順鉑處理和進(jìn)行順鉑和usp9x抑制劑WP1130聯(lián)合處理后，MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三種細(xì)胞株細(xì)胞活力、增殖情況以及細(xì)胞內(nèi)usp9x蛋白的表達(dá)情況的變化。用usp9x siRNA干擾乳腺癌細(xì)胞系內(nèi)usp9x的表達(dá)，研究單純順鉑處理和進(jìn)行順鉑和us

4、p9x siRNA聯(lián)合處理后，MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三種細(xì)胞株細(xì)胞活力的變化，以及usp9x siRNA干擾乳腺癌細(xì)胞系內(nèi)usp9x的表達(dá)再聯(lián)合usp9x抑制劑WP1130處理后MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三種細(xì)胞株細(xì)胞活力的變化。為探討usp9x影響乳腺癌耐藥的機(jī)制，我們?cè)跈z測(cè)各種處理下MDA-MB-231、MDA-MB-468和Bcap-37三種細(xì)胞株中內(nèi)usp9x的

5、表達(dá)情況的同時(shí)也檢測(cè)了三種細(xì)胞株中抗凋亡蛋白Mcl-1的表達(dá)情況，并分析了Mcl-1變化與usp9x表達(dá)的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)順鉑處理后，三種乳腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞活力及增殖情況均下降，乳腺癌細(xì)胞系對(duì)順鉑的敏感性與usp9x的表達(dá)高低負(fù)相關(guān);(2)聯(lián)合應(yīng)用usp9x活性抑制后，ER陰性的乳腺癌細(xì)胞株的細(xì)胞活力、增殖情況以及usp9x的表達(dá)均下降，即乳腺癌細(xì)胞系對(duì)順鉑的敏感性增加，而ER陽(yáng)性的細(xì)胞株不受影響

6、;(3) siRNA敲除usp9x后，usp9x的表達(dá)均下降，ER陰性的乳腺癌細(xì)胞株對(duì)順鉑的敏感性增加，而ER陽(yáng)性的細(xì)胞株不受影響;(4) siRNA敲除usp9x后再行usp9x活性抑制處理，則不能增加三種乳腺癌細(xì)胞系對(duì)順鉑的敏感性(5) usp9x活性抑制處理和siRNA敲除usp9x處理后三種細(xì)胞株內(nèi)usp9x的表達(dá)變化與抗凋亡蛋白Mcl-1蛋白的表達(dá)變化正相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　usp9x的高表達(dá)會(huì)明顯降低乳腺癌細(xì)胞