硫化氫緩釋供體ADT后處理對大鼠在體心肌缺血再灌注損傷的保護——AMPK介導(dǎo)的自噬流在其中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察硫化氫緩釋供體ADT后處理是否對大鼠在體心肌缺血再灌注（I/R）損傷具有保護作用，探討腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）介導(dǎo)的自噬流在其中的作用，研究硫化氫后處理心肌保護的機制。
　　方法：
　　成年雄性SD大鼠202只，建立急性大鼠在體心肌I/R損傷模型。隨機分為9組：假手術(shù)組（Sham組）、單純?nèi)毖俟嘧φ战M（I/R+vehicle組）、緩釋硫化氫供體ADT后處理組（I/R+ADT組）、單純ADT對照

2、組（Sham+ADT組）、AMPK抑制劑Compound c組（I/R+ADT+CC組）、Compound c溶劑二甲基亞砜對照組（I/R+ADT+DMSO組）、氯喹溶劑生理鹽水對照組（I/R+ADT+NS組），自噬流抑制劑氯喹組（I/R+ADT+CQ），單純氯喹對照組（I/R+CQ組）。除Sham和Sham+ADT組外，其余各組均缺血30 min，再灌注4 h。Sham，I/R+vehicle和I/R+CQ組于缺血末再灌注開始即刻腹腔

3、注射ADT溶劑（10％DMSO+玉米油），其余各組均注射ADT（50 mg/kg）；I/R+ADT+CC和I/R+ADT+DMSO組于再灌注開始即刻分別靜脈給予Compound c（250μg/kg）和等體積DMSO；I/R+ADT+CQ和I/R+CQ組于手術(shù)開始前1 h腹腔注射氯喹（10 mg/kg），I/R+ADT+NS組注射等體積生理鹽水。再灌注4 h末，提取心臟，采用氯化三苯基四氮唑染色法（TTC法）測定心肌梗死范圍并通過蘇木精

4、-伊紅染色法觀察心肌細胞形態(tài)學(xué)變化；采用原位二氫乙啶（DHE）染色法檢測活性氧（ROS）的生成。采用免疫印跡法（Western blot技術(shù)）檢測p-AMPK/t-AMPK、p-S6/t-S6、Beclin-1、LAMP-2、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　與Sham組和Sham+ ADT組比較，各組心肌梗死范圍增大，心肌細胞損傷增加，ROS生成增多，Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和P62蛋白表達上調(diào)，L

5、AMP-2蛋白表達下調(diào)（P<0.05）。
　　與I/R+vehicle組比較，I/R+ADT組心肌梗死范圍減小，心肌細胞損傷和ROS生成減少，p-AMPK/AMPK及LAMP-2蛋白表達上調(diào)，p-S6/S6、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ及P62蛋白表達下調(diào)（P<0.05）。
　　與I/R+ADT組比較，I/R+ADT+CC組心肌梗死范圍增加，細胞損傷和ROS生成增加，p-AMPK/AMPK及LAMP-2蛋白表達下調(diào)，p-S