叉頭蛋白FOXK2調(diào)控雌激素受體ERα的機(jī)理.pdf

1、博士學(xué)位論文叉頭蛋白F O X K 2 調(diào)控雌激素受體E R a 的機(jī)理T h e R e g u l a t i o nM e c h a n i s m o fE s t r o g e nR e c e p t o r 僅b y F O X K 2學(xué) 號： ! ! Q 堡塑答辯日期： 2 Q 三墨：立豎大連理工大學(xué)D a l i a n U n i v e r s i t yo f T e c h n o l o g y大連理工大

2、學(xué)博士學(xué)位論文摘 要近年來，乳腺癌的發(fā)病率逐漸上升，嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量。研究表明，雌激素受體( e s t r o g e nr e c e p t o r s ，E R s ) 在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。E R a 是一種類固醇核受體，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和存活的作用，己成為激素依賴的乳腺癌治療的重要靶點(diǎn)之一。因此，鑒定對E R a 功能具有調(diào)控作用的分子可以促進(jìn)乳腺癌治療策略的發(fā)展。F O X K 2 是一種叉頭(

3、f o r k h e a db o x ，F(xiàn) O X ) 蛋白轉(zhuǎn)錄因子。有研究表明，F(xiàn) O X家族的F O X A l 和F O X 0 3 a 可以通過其保守的D N A 結(jié)合結(jié)構(gòu)域( F K H d o m a i n ) 和E R a相互作用，并調(diào)控其功能，而F O X K 2 也具有F K H 結(jié)構(gòu)域。因此，F(xiàn) O X K 2 蛋白對E R a的功能可能也具有調(diào)控作用。本研究從F O X K 2 與E R a 的相互作用入手，

4、探討了F O X K 2對E R a 介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)理。本論文的主要工作如下：1 ．通過免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)和免疫印跡實(shí)驗(yàn)研究了F O X K 2 和E R a 在乳腺癌中的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)F O X K 2 和E R a 的蛋白水平在乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞系中存在負(fù)相關(guān)。再使用F O X K 2 的全長和各缺失體，通過免疫共沉淀、哺乳動物細(xì)胞雙雜和免疫熒光等實(shí)驗(yàn)，研究了F O X K 2 和E R a 之間的相互作用。結(jié)果表明F O

5、X K 2 通過其F K H 結(jié)構(gòu)域和E R a相互作用，這種相互作用發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)。2 ．由于F O X K 2 和E R a 在乳腺癌組織和乳腺癌細(xì)胞中的蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，接下來通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測了F O X K 2 對E R a 蛋白水平的影響。結(jié)果表明F O X K 2 能夠縮短E R a 的半衰期，并以劑量依賴的方式下調(diào)E R a 的蛋白水平，但不影響其m R N A 水平。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)F O X K 2 是通過促進(jìn)E

6、R a 的泛素化降解降低其蛋白水平的。3 ．B A R D l 是E R a 泛素E 3 連接酶B R C A l ／B A R D l 的一個(gè)亞基，通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)F O X K 2 能夠增強(qiáng)E R a 與B R C A l ／B A R D l 之間相互作用，而沉默F(xiàn) O X K 2的表達(dá)能夠減弱掉E R a 與B R C A l ／B A R D l 之間相互作用，表明F O X K 2 可以作為一個(gè)橋梁蛋白促進(jìn)E

7、R a 與B R C A l ／B A R D l 的結(jié)合，進(jìn)而增強(qiáng)E R a 的泛素化，導(dǎo)致其降解。4 。進(jìn)一步通過報(bào)告基因和R e a l ．t i m eP C R 等實(shí)驗(yàn)，研究了F O X K 2 對E R a 的轉(zhuǎn)錄活性及其靶基因m R N A 水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明F O X K 2 能夠抑制E R a 的轉(zhuǎn)錄活性，并下調(diào)E R a 下游靶基因如@ d i n D 1 和G R E B l 的m R N A 水平。5 ．最

8、后，通過細(xì)胞集落形成、M T T 以及流式細(xì)胞儀等實(shí)驗(yàn)檢測了F O X K 2 對乳腺癌細(xì)胞功能的影響，發(fā)現(xiàn)F O X K 2 能夠抑制E R a 依賴的細(xì)胞增殖能力。本研究首次將F O X K 2 與E R a 聯(lián)系起來，確定F O X K 2 是E R a 的一個(gè)有效的負(fù)調(diào)控因子，能通過E R a 抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，有助于闡述E R a 介導(dǎo)的乳腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理，為乳腺癌的治療提供理論依據(jù)，為E R a 介導(dǎo)的疾病的治療開