肝X受體激動劑GW3965對與EMT相關的非小細胞肺癌獲得性吉非替尼耐藥的逆轉及機制研究.pdf

1、目的:
　　探討上皮間質轉化與獲得性吉非替尼耐藥的關系及相關標志物在獲得性耐藥前后的變化，并研究肝X受體的人工合成激動劑GW3965對獲得性吉非替尼耐藥的逆轉與EMT過程相關性及具體分子機制，旨在為今后肝X受體及吉非替尼耐藥研究提供新的思路。
　　方法:
　　取處于對數生長期的細胞，觀察細胞形態(tài)并經倒置顯微鏡圖像采集系統進行細胞拍照采集圖像信息;Transwell實驗檢測不同細胞株侵襲能力差異，并用倒置顯微鏡采集圖像并

2、統計;調閱耐藥株HCC827/GR-8-1與親本HCC827細胞差異基因表達芯片數據EMT相關標志物編碼基因表達差異;RT-PCR檢測不同敏感性細胞株間VIM表達量差異;Western blot及免疫組化檢測差異波形蛋白表達量差異;CCK-8實驗檢測LXR激動劑的單獨應用對細胞毒力作用，及兩藥聯合應用對吉非替尼敏感性的影響;克隆形成實驗檢測GW3965單獨或聯合應用吉非替尼對增殖的影響;Western blot進一步驗證兩藥聯用對細胞凋

3、亡蛋白表達量的影響;Western blot檢測兩藥聯合過程對EMT相關標志物尤其是波形蛋白表達量的影響并分析兩藥聯用后細胞增殖及蛋白表達量變化及其與細胞耐藥性關系。
　　結果:
　　細胞形態(tài)觀察顯示耐藥的細胞間質特征更明顯。侵襲實驗顯示HCC827及H358侵襲能力弱，而H1299、H1975侵襲能力強，獲得性耐藥株侵襲能力也上升。對吉非替尼不敏感的細胞株VIM表達量高，Western blot及免疫組化同樣顯示H1975

4、、H1299級獲得性耐藥株波形蛋白表達量顯著增高。EMT及相關主要標志物波形蛋白與吉非替尼耐藥性正相關。LXR激動劑單獨或聯合吉非替尼處理獲得性耐藥株HCC827/GR-8-1細胞后，CCK-8結果顯示GW3965對細胞無明顯毒力作用。但在多株耐藥株中可顯著增高細胞對吉非替尼敏感性，克隆形成實驗同樣顯示，GW3965聯合吉非替尼組細胞克隆形成率顯著低于單用吉非替尼組。凋亡蛋白檢測顯示兩藥聯用可增加凋亡蛋白如caspase-3等的表達，降