絲氨酸蛋白酶RHBDD1通過調(diào)控p-Akt和CDK2促進乳腺癌生長.pdf

1、Rhomboid蛋白酶與癌癥的發(fā)生和預后有密切關(guān)系。RHBDD1是本研究組在生精細胞基因表達差異研究中發(fā)現(xiàn)的一個Rhomboid家族新成員，在睪丸中高水平表達，它能切割Bcl-2家族促凋亡分子BIK，進而調(diào)控BIK介導的凋亡過程。RHBDD1參與調(diào)控結(jié)直腸癌細胞的生長和凋亡。
　　做為惡性癌癥之一，乳腺癌具有異質(zhì)性和致死率高的特征，而且目前尚沒有針對乳腺癌抗藥性的有效分子標記物。因此對RHBDD1在乳腺癌中如何發(fā)揮生物學功能調(diào)控乳

2、腺癌細胞惡性表型及其分子機制進行深入研究。
　　利用組織微陣列聯(lián)合免疫組織化學技術(shù)檢測了116例乳腺癌組織和39例對應(yīng)臨近癌旁組織內(nèi)RHBDD1的表達情況;還檢測了84例乳腺癌組織內(nèi)RHBDD1、p-Akt和CDK2的表達情況。選取了三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231和ER陽性乳腺癌細胞MCF7，使用CRISPR/Cas9基因改造系統(tǒng)，將乳腺癌細胞的RHBDD1敲除，在體外水平觀察RHBDD1對乳腺癌細胞惡性表型的影響。體外實驗

3、包括:生長曲線、集落形成、遷移和侵襲實驗、劃痕實驗;還用熒光顯微技術(shù)結(jié)合TUNEL實驗、流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡和細胞周期分布。使用RNA測序和蛋白質(zhì)免疫印記技術(shù)檢測RHBDD1在乳腺癌細胞內(nèi)發(fā)揮功能的分子機制。在動物體內(nèi)水平實驗中，將野生型和RHBDD1敲除型的MDA-MB-231細胞注射到裸鼠皮下，定期測量皮下瘤的生長情況。
　　RHBDD1在乳腺癌組織中的表達量顯著高于癌旁組織(p=1.566e-12);將免疫組織化學評分大

4、于、等于5定為RHBDD1高表達，大于0、小于5定為RHBDD1低表達。在116個樣品中，有94/116的乳腺癌是RHBDD1高表達，所占比例為81％;只有11/39的癌旁組織是RHBDD1高表達，所占比例為28％。RHBDD1的高表達與病理學TNM分期(p=0.01474)和ER表達量(p=0.04679)相關(guān)。
　　體外實驗結(jié)果表明，RHBDD1敲除能夠促進乳腺癌細胞凋亡，抑制乳腺癌細胞增殖、遷移和侵襲。RHBDD1敲除導致p

5、-Akt和CDK2的表達量均顯著下降，細胞周期進程和G1/S期轉(zhuǎn)變受到抑制。動物體內(nèi)水平實驗證明，RHBDD1缺失能夠抑制裸鼠皮下腫瘤的生長。
　　用Spearman相關(guān)性配對檢驗分析了84例乳腺癌組織內(nèi)RHBDD1、p-Akt和CDK2的表達，發(fā)現(xiàn)RHBDD1和p-Akt的表達顯著正相關(guān)(ρ=0.437; p=3.245e-05)，RHBDD1和CDK2的表達顯著正相關(guān)(ρ=0.386; p=0.0003)。
　　綜上所述