液質(zhì)聯(lián)用和免疫比濁法測定三種抗腫瘤藥物血濃度相關性研究.pdf

1、目的:1.建立簡便、靈敏的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測定患者血漿中5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)和多西紫杉醇(DTX)的濃度。2.采用免疫比濁法即納米增強免疫比濁法(nanoparticle immunoassay，NPIA)測定患者血漿5-FU、PTX和DTX濃度。3.比較LC-MS/MS和NPIA兩種方法5-FU、PTX和DTX血漿濃度測定結(jié)果的相關性。
　　方法:1.LC-MS/MS方法:5-FU

2、:色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18柱(150mm×4.6 mm，5μm);流動相:0.05％氨水∶甲醇(2∶98，v/v)，在線脫氣;流速:0.3 mL/min;柱溫:30C。血漿樣本經(jīng)液液萃取處理后，進樣體積為10μL進行分析。PTX和DTX:色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流動相:0.1％甲酸∶乙腈(40∶60，v/v)，在線脫氣;流速:0.6 mL/min;柱溫:3

3、0℃。血漿樣本經(jīng)沉淀蛋白處理后，進樣體積10μL進行分析。
　　2.NPIA方法:5-FU、PTX和DTX血漿樣品按一定操作程序（采用專屬試劑盒）處理后，注入CS-600B全自動生化儀進行分析。
　　3.統(tǒng)計學分析:(1)以LC-MS/MS方法測定值為自變量X，以NPIA方法測定值為因變量Y，經(jīng)SPSS.17.0進行線性回歸分析，建立一元線性回歸模型，評價兩者相關性。(2)對LC-MS/MS方法和NPIA方法測定血漿5-FU

4、、PTX和DTX濃度的結(jié)果進行Bland-Altman數(shù)據(jù)處理，評價兩種方法測定結(jié)果的一致性。
　　結(jié)果:1.本課題建立的LC-MS/MS方法專屬性強，血漿中的雜質(zhì)對5-FU、PTX和DTX的測定無影響。5-FU、PTX和DTX的方法學驗證中，基質(zhì)效應平均值分別為104.40％、107.18％和112.57％，絕對回收率的平均值分別為80.61％、99.41％和95.76％，日內(nèi)和日間的準確度與精密度分別為88.2％-109.4％

5、、100.1％-115.7％和95.1％-100.2％,RSD％為3.95-13.69、2.49-9.66和2.88-11.9,5-FU、PTX和DTX分別在10-800 ng/mL、10-200 ng/mL和10-2000 ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關系(R2＞0.99)。5-FU、PTX和DTX的血漿樣本穩(wěn)定性好，符合測定要求。
　　2.LC-MS/MS和NPIA兩種方法測定5-FU、PTX和DTX的線性回歸方程分別為y=1

6、.019x-8.746(R=0.939, p＜0.001)、y=0.839x+17.975(R=0.878, p＜0.001)和y=1.105x+10.003(R=0.965，p＜0.001)，因此可認為兩種方法顯著相關。
　　3.LC-MS/MS方法測定5-FU、PTX和DTX樣本平均值分別為273.82 ng/mL、43.56 ng/mL和378.1 ng/mL，NPIA方法測定平均值分別為270.18 ng/mL、54.49

7、ng/mL和427.7ng/mL，兩種方法的95％的置信區(qū)間分別為-132.5～125.2 ng/mL、-11.6～33.4 ng/mL和-231.7～331.1 ng/mL說明兩種檢測方法無顯著性差異，可認為兩種檢測方法測定結(jié)果的一致性良好。
　　結(jié)論:1.本課題分別建立了檢測血漿中5-FU、PTX和DTX濃度的LC-MS/MS方法，此方法高效、靈敏、準確，適用于5-FU、PTX和DTX血漿濃度監(jiān)測。
　　2.NPIA方法