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1、目的:
通過觀察高糖培養(yǎng)下BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化以及PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)變化,探討高糖對(duì)于小膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)元的影響,以及JAK2/STAT3-Cav-1-NR2B信號(hào)通路在糖尿病神經(jīng)病理性疼痛中的作用。
方法:
1.高糖刺激BV2細(xì)胞,將BV2細(xì)胞分為2組:正常組(C組)、高糖組(H組),分別給予低糖培養(yǎng)基(糖濃度為5.5mmol/L)、高糖培養(yǎng)基(
2、糖濃度為33.3mmol/L)、培養(yǎng)24h后,采用蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化。
2.給予JAK2抑制劑AG490,將BV2細(xì)胞分為4組:正常組(C-1組)、高糖組(H-1組)、抑制劑組(AG490-1組)、溶劑對(duì)照組(SC-1組),分別給予低糖培養(yǎng)基(糖濃度為5.5mmol/L)、高糖培養(yǎng)基(糖濃度為33.3mmol/L)、高糖培養(yǎng)基+AG490(50
3、μmol/L)、高糖培養(yǎng)基+DMSO進(jìn)行培養(yǎng),24h后,采用蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)BV2細(xì)胞中p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)變化。
3.利用transwell小室構(gòu)建BV2細(xì)胞和PC12細(xì)胞共培養(yǎng)體系,隨機(jī)分為5組:正常組(C-2組)、高糖組(H-2組)、抑制劑組(AG490-2組)、溶劑對(duì)照組(SC-2組)以及高糖對(duì)照組(HC-2組),前四組共培養(yǎng)體系分別給予低糖培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)基、高糖培養(yǎng)
4、基+AG490(50μmol/L)、高糖培養(yǎng)基+DMSO,HC-2組僅用高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)PC12細(xì)胞,24h后,采用蛋白免疫印跡(Western blotting)檢測(cè)PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)變化。
結(jié)果:
1.高糖刺激BV2細(xì)胞后:與C組相比, H組p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)上調(diào)(P<0.05);
2.給予抑制劑AG490后,BV2細(xì)胞中:與C-1組相比,H-1組和SC-1組
5、p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)上調(diào)(P<0.05);與H-1組相比,AG490-1組的p-JAK2、p-STAT3的表達(dá)下調(diào)(P<0.05);H-1組的p-JAK2、p-STAT3表達(dá)與SC-1組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3.共培養(yǎng)體系中的PC12細(xì)胞:與C-2組相比,H-2組的PC12細(xì)胞中p-Cav-1、p-NR2B的表達(dá)上調(diào)(P<0.05);與H-2組相比,AG490-2組PC12細(xì)胞中的p-Cav-1、p-NR2B的
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