MCP-1-JAK2-STAT3-NR2B在Ⅱ型糖尿病大鼠神經(jīng)病理性疼痛中的作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　探討單核細(xì)胞趨化蛋白-1是否作用于脊髓背角膠質(zhì)細(xì)胞JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，活化NMDAR，參與和維持大鼠Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛。
　　方法:
　　雄性SD大鼠給予高脂高糖喂養(yǎng)8周后出現(xiàn)胰島素抵抗，腹腔以35mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)注射，3天后血糖≥16.7 mmol/1大鼠為Ⅱ型糖尿病大鼠，注射STZ前和14天后測機械縮足閾值(MWT)和熱縮足潛伏期(TWL)，14天后測得MWT、TWL值低于

2、注射基礎(chǔ)值的80％以下者為Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠。采用隨機法，將Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛大鼠分為4組(n=36):Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛組(DNP組)、Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛復(fù)合MCP-1抑制劑組(DM組)、Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性痛復(fù)合JAK2抑制劑組(DA組)和溶劑對照組(SC組)。DM、DA、SC組大鼠分別于注射STZ14天后蛛網(wǎng)膜下腔置管，3天后DM、DA、SC組蛛網(wǎng)膜下腔分別給予MCP-1中和抗體、JAK2抑制劑和DMSO溶劑，

3、DNP組大鼠不做任何處理。另取36只正常大鼠為對照組（C組），普通飼料喂養(yǎng)。蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3、7和14天時，各組隨機取9只大鼠測定MWT和TWL，取大鼠L4-6脊髓膨大，免疫印跡實驗檢測p-JAK2、p-STAT3、p-NR2B的表達(dá)情況;免疫熒光雙染實驗檢測脊髓背角p-STAT3表達(dá)情況以及p-STAT3與小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元共表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.血糖、胰島素敏感指數(shù)情況:與C組比較，DNP

4、組大鼠飼養(yǎng)8周后血糖升高，但沒有達(dá)到糖尿病診斷的標(biāo)準(zhǔn)-血糖≥16.7mmol/L(C組5.50±1.20，DNP組6.14±0.91)，而空腹胰島素濃度升高(C組6.67±1.35，DNP組12.91±3.67)(P＜0.05)，胰島素敏感性指數(shù)下降(C組-1.45±0.23，DNP組-2.45±0.37)(P＜0.05)。在注射STZ3天后，DNP組大鼠尾靜脈血糖明顯升高(C組5.77±0.89，DNP組21.15±3.80)(P＜0

5、.05)。
　　2.機械痛閾和熱痛閾(MWT、TWL)變化:腹腔注射STZ之前，各組大鼠MWT、TWL差異無統(tǒng)計學(xué)意義。腹腔注射STZ第14天，與C組相比，DNP、DM、DA、SC組MWT降低和TWL縮短(P＜0.05）。蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3、7、14天，與C組相比，DNP、SC組MWT值降低，TWL值縮短(P＜0.05）;與DNP組相比，DM、DA組在給藥第1、3、7、14天后MWT升高和TWL延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0

6、.05);SC組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.脊髓背角p-JK2、p-STAT3、p-NR2B免疫印跡結(jié)果:與C組比較，DNP組和SC組在蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3、7和14天時脊髓背角p-JAK2、p-STAT3、p-NR2B蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.05);與DNP組比較，DM、DA組在蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3、7和14天時脊髓背角p-JAK2、p-STAT3、p-NR2B表達(dá)下調(diào)(P＜0.05）;在蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第

7、1、3、7和14天時，DNP組與SC組各指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。
　　4.脊髓背角p-STAT3免疫染色結(jié)果以及p-STAT3與小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元共染結(jié)果:蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3、7和14天，免疫染色顯示p-STAT3主要在DNP、SC組的脊髓背角淺層表達(dá)，C組大鼠較少表達(dá);在DNP大鼠中，熒光雙染顯示，在蛛網(wǎng)膜下腔給藥后第1、3天，p-STAT3主要與小膠質(zhì)細(xì)胞共存，幾乎不與星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元

8、共表達(dá)，到第7、14天時，仍主要與小膠質(zhì)細(xì)胞共存，即使到實驗第28天，也主要與小膠質(zhì)細(xì)胞共存;蛛網(wǎng)膜下腔給予MCP-1、JAK2抑制劑后，熒光雙染顯示DM、DA組大鼠脊髓背角淺層p-STAT3表達(dá)減少，p-STAT3與小膠質(zhì)細(xì)胞共存減少;DNP組與SC組p-STAT3表達(dá)及p-STAT3與小膠質(zhì)細(xì)胞共染情況無明顯變化。
　　結(jié)論:
　　Ⅱ型糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠機械痛閾和熱敏痛閾減低，單核細(xì)胞趨化蛋白-1可誘導(dǎo)脊髓背角小膠