2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、Shp2對(duì)多種神經(jīng)系統(tǒng)組織器官和細(xì)胞類型的發(fā)育及功能具有重要調(diào)控作用。放射狀膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要功能近年來被逐漸發(fā)現(xiàn),目前對(duì)于Shp2在放射狀膠質(zhì)細(xì)胞中的功能尚不清楚。受人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(hGFAP)啟動(dòng)子調(diào)控的Cre重組酶表達(dá)于放射狀膠質(zhì)細(xì)胞中,是放射狀膠質(zhì)細(xì)胞條件性基因敲除的有力工具。因此,培育并研究基于hGFAP啟動(dòng)子的Shp2條件性敲除小鼠對(duì)于揭示調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和功能的分子機(jī)制具有重要意義。
  研究

2、目的:
  (1)培育并鑒定基于hGFAP啟動(dòng)子的Shp2條件性基因敲除小鼠
  (2)觀察并研究Shp2條件性敲除對(duì)幼鼠生存、生長及軀體感覺運(yùn)動(dòng)功能發(fā)育的影響
  (3)研究Shp2條件性敲除對(duì)幼鼠大腦皮質(zhì)、小腦及腦干組織結(jié)構(gòu)的影響并初步探討相關(guān)分子機(jī)制
  研究方法:
  本研究通過hGFAP-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠和Shp2flox/flox基因打靶小鼠交配產(chǎn)生hGFAP-Cre/Shp2flox/flox

3、小鼠,即Shp2條件性敲除小鼠。通過基因鑒定、Real-timePCR、Western blot及免疫組化等方式對(duì)Shp2條件性敲除小鼠進(jìn)行多方面的鑒定。觀察記錄Shp2條件性敲除小鼠的外觀、生存時(shí)長、出生后體重及大腦重量增長情況,并通過自主回巢實(shí)驗(yàn)、循聲運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、軀體自主翻正實(shí)驗(yàn)及抓桿實(shí)驗(yàn)評(píng)估Shp2條件性敲除幼鼠的感覺運(yùn)動(dòng)功能的發(fā)育情況。采用石蠟切片H-E、甲苯胺藍(lán)染色對(duì)Shp2條件性敲除小鼠的大腦皮質(zhì)、小腦及腦干進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)學(xué)觀

4、察,并通過免疫組化、免疫熒光對(duì)Shp2條件性敲除小鼠大腦皮質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡的情況以及大腦皮質(zhì)、小腦、腦干神經(jīng)元細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量的分布情況進(jìn)行觀察。最后本研究通過Western blot實(shí)驗(yàn)對(duì)Shp2條件性敲除小鼠大腦皮質(zhì)中Akt,Erk信號(hào)通路蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。
  研究結(jié)果:
  第一部分
  經(jīng)hGFAP-Cre小鼠和Shp2flox/flox小鼠交配成功培育出Shp2條件性敲除小鼠。Shp2條件性

5、敲除小鼠在腦組織中檢測(cè)出敲除特征性序列,且腦組織中Shp2的mRNA、蛋白表達(dá)水平顯著下降。
  第二部分
  Shp2條件性敲除幼鼠體形減小,體重及腦重增長遲滯,壽命縮短。Shp2條件性基因敲除幼鼠自主回巢能力、循聲運(yùn)動(dòng)能力、自主翻正能力及抓桿能力顯著下降。
  第三部分
  Shp2條件性基因敲除小鼠大腦皮質(zhì)面積、厚度減小,大腦皮質(zhì)神經(jīng)元減少、星形膠質(zhì)細(xì)胞比例增多、伴有皮質(zhì)細(xì)胞凋亡增加、腦室區(qū)細(xì)胞增殖下降及E

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