外源性硫化氫對(duì)β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以Aβ25-35肽誘導(dǎo)Neuro-2a細(xì)胞損傷，建立體外阿爾茨海默?。ˋD）的細(xì)胞模型。通過外源性給予H2S供體（NaHS），觀察不同濃度H2S對(duì)毒性Aβ25-35肽誘導(dǎo)的Neuro-2a細(xì)胞自噬性死亡的影響及其可能相關(guān)的機(jī)制，旨在為H2S對(duì)AD的治療提供更多的依據(jù)。
　　方法：將Neuro-2a細(xì)胞隨機(jī)分為空白對(duì)照組、Aβ25-35處理組、Aβ25-35+ NaHS組、Aβ25-35+3-甲基腺嘌呤（3-MA）組、N

2、aHS組及Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組，Aβ25-35+NaHS組和Aβ25-35+3-MA組細(xì)胞分別用NaHS和3-MA預(yù)處理2 h后均加用Aβ25-35繼續(xù)處理24h， Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組除加入NaHS預(yù)處理外需在Aβ25-35處理前0.5 h加入NVP-BEZ235。采用MTT法觀察各組細(xì)胞存活率，蛋白質(zhì)印跡法檢測自噬蛋白Beclin-1、微管相關(guān)蛋白（LC3）及P62的表達(dá)，免疫

3、熒光法檢測LC3的表達(dá)及分布，透射電鏡法觀察自噬體的形成。
　　結(jié)果：(1)與空白對(duì)照組相比，Aβ25-35作用細(xì)胞后，細(xì)胞存活率降低（P＜0.05），Beclin-1及LC3-Ⅱ表達(dá)增加，P62表達(dá)降低（P＜0.05），熒光顯微鏡及電鏡下可見細(xì)胞自噬體明顯增多。(2)與Aβ25-35組相比， Aβ25-35+3-MA組和 Aβ25-35+NaHS組細(xì)胞存活率均增高（ P＜0.05）， Beclin-1及LC3-Ⅱ表達(dá)降低，P62

4、增高（P＜0.05），自噬體減少。（3） Aβ25-35+NaHS組p-Akt和p-mTOR的表達(dá)高于Aβ25-35組（P＜0.05），而加入特異性 PI3K/Akt通路抑制劑 NVP-BEZ235后， Aβ25-35+NaHS+NVP-BEZ235組細(xì)胞p-Akt和p-mTOR表達(dá)與Aβ25-35+NaHS組相比降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：外源性 H2S能對(duì)抗 Aβ25-35的細(xì)胞毒性，可能與活化PI3K/Akt/mTOR