基于Shh信號(hào)通路研究針刺干預(yù)腦梗死模型大鼠神經(jīng)修復(fù)與發(fā)生的分子機(jī)制.pdf

1、目的:本研究旨在觀察腦梗死后Shh信號(hào)通路的變化規(guī)律及針刺干預(yù)效應(yīng)，從促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)與再生的角度深入揭示針刺治療腦梗死的分子機(jī)制。
　　方法：以Longa腔內(nèi)線栓法復(fù)制大鼠腦梗死模型為研究對(duì)象，分為空白組、假手術(shù)組、模型組和針刺組，其中后三組按照術(shù)后1H、3H、6H、9H、12H、24H、3D、7D和12D各分為9個(gè)時(shí)相組，共28組，每組10只動(dòng)物。以神經(jīng)功能缺損評(píng)分法評(píng)估各組動(dòng)物的神經(jīng)缺損和恢復(fù)情況；采用氯化三苯基四氮唑染色法觀測(cè)

2、腦梗死后腦組織缺血體積變化；選取免疫組化法檢測(cè)腦梗死后海馬區(qū)突觸素SYP及微管相關(guān)蛋白MAP2、DCX的變化規(guī)律和電針干預(yù)效應(yīng)；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)各組動(dòng)物腦梗死后Shh信號(hào)通路相關(guān)因子Shh、Ptched-1、Smo及Gli1的mRNA表達(dá)的變化規(guī)律和電針干預(yù)效應(yīng)。
　　結(jié)果：
　　1.針刺對(duì)神經(jīng)功能缺損評(píng)分的影響：MCAo模型后24H，模型組大鼠NSS評(píng)分呈上升趨勢(shì)，至24H評(píng)分達(dá)最高值后呈下降趨勢(shì)；針刺組大鼠NSS評(píng)分

3、變化趨勢(shì)與模型組大致相同，各時(shí)相神經(jīng)功能缺損評(píng)分均顯著低于同時(shí)相模型組，且在6H后有顯著性差異。
　　2.針刺對(duì)腦缺血體積的影響：空白組與假手術(shù)組大鼠腦組織TTC染色結(jié)果呈正常深紅色，未見明顯的梗死灶。MCAo后6H，模型組大鼠腦缺血體積均呈上升趨勢(shì)，至24H達(dá)到峰值后逐漸下降；針刺組腦缺血體積變化趨勢(shì)與模型組大致相同，各時(shí)相腦缺血體積均小于同時(shí)相模型組，且兩組在12H、24H、3D、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　

4、　3.針刺對(duì)突觸素SYP表達(dá)的影響：空白組與各時(shí)相假手術(shù)組大鼠腦組織SYP蛋白R(shí)OD值對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組和針刺組MCAo大鼠SYP蛋白R(shí)OD值在3H后均下降，于24H降低至最低點(diǎn)后緩慢上升，在6H后ROD值均低于空白組和同時(shí)相假手術(shù)組。針刺組各時(shí)相ROD值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在7D、12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.針刺對(duì)微管相關(guān)蛋白 MAP2表達(dá)的影響：空白組與各時(shí)相假手術(shù)組大鼠腦組織MAP2蛋白R(shí)OD值和

5、陽性表達(dá)面積對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組與針刺組MCAo大鼠MAP2蛋白R(shí)OD值和陽性表達(dá)面積均在1H后下降，于24H降低至最低點(diǎn)后緩慢上升，ROD值和陽性表達(dá)面積在6H后均低于空白組和同時(shí)相假手術(shù)組。針刺組各時(shí)相ROD值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在24H、3D、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；針刺組各時(shí)相陽性表達(dá)面積均高于同時(shí)相模型組，在9H后相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.針刺對(duì)雙皮質(zhì)素 DCX蛋白表達(dá)的影響：空白組與各時(shí)

6、相假手術(shù)組大鼠腦組織DCX蛋白R(shí)OD值對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組和模型組MCAo大鼠DCX蛋白R(shí)OD值均在1H后下降，于24H降低至最低點(diǎn)后于3D后緩慢上升，ROD值在6H后均低于空白組和同時(shí)相假手術(shù)組。針刺組各時(shí)相ROD值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在24H、3D、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　6.針刺對(duì)Shh通路相關(guān)因子表達(dá)的影響：各時(shí)相假手術(shù)組Shh通路相關(guān)因子mRNA表達(dá)與空白組對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組與針

7、刺組Shh通路相關(guān)基因Shh、Ptch、Smo和GLI1 mRNA表達(dá)均呈現(xiàn)“上升-下降-上升”的趨勢(shì)，在1H后呈上升趨勢(shì)，至12H達(dá)到高峰后逐漸下降至3D時(shí)達(dá)最低點(diǎn)，7D后再次上升，其中：
　?、倌Ｐ徒M各時(shí)相Shh mRNA RQ值在9H、12H和12D時(shí)與空白組和同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時(shí)與空白組和同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值均高

8、于同時(shí)相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、谀Ｐ徒M各時(shí)相Ptch mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D時(shí)與空白組及同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時(shí)與空白組及同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、勰Ｐ徒M各時(shí)相Sm

9、o mRNA RQ值在9H、12H和12D時(shí)與空白組和同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值在6H、9H、12H、24H、7D和12D時(shí)與空白組和同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?、苣Ｐ徒M各時(shí)相Gli1 mRNA RQ值在6H、9H、12H和12D時(shí)與空白組及同時(shí)相假手術(shù)組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ

10、在6H、9H、12H、24H、7D和12D時(shí)與空白組及同時(shí)相假手術(shù)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。針刺組各時(shí)相RQ值均高于同時(shí)相模型組，且兩組在12H、24H、7D和12D時(shí)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.針刺可改善MCAo模型大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀，降低MCAo模型大鼠腦缺血體積。
　　2.針刺可減輕梗死周圍區(qū)突觸以及軸突、樹突的損傷，促進(jìn)突觸以及軸突、樹突的生長(zhǎng)；
　　3.針刺可顯著促進(jìn)MCAo模型大鼠12H、