類泛素折疊修飾蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討類泛素折疊修飾蛋白Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的表達(dá)及作用，并進一步探討其可能的分子機制。
　　方法：免疫熒光法觀察 Ufm1在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)和定位。使用濃度為100ng/ml的脂多糖LPS體外處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系HUVECs，分別刺激0h、3h、6h、12h、24h、48h后，采用Real-Time PCR檢測炎性細(xì)胞因子（TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1）和Ufm1的mRN

2、A水平,同時通過Western blotting檢測Ufm1蛋白水平的變化。另外，構(gòu)建Ufm1過表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至HUVECs，經(jīng)LPS刺激3h后，采用Real-Time PCR檢測各組中上述炎性細(xì)胞因子的變化。Western blotting法檢測NF-κB的總蛋白表達(dá)量及其入核量，以探討Ufm1抑制HUVECs炎性細(xì)胞因子表達(dá)的可能分子機制。
　　結(jié)果：Ufm1蛋白在HUVECs的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。在LPS誘導(dǎo)HUV

3、ECs炎癥反應(yīng)中，主要炎性細(xì)胞因子TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1的mRNA水平隨著時間變化而升高，并且在刺激后3-6h達(dá)到高峰，且有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05）。同時，Ufm1的 mRNA水平和蛋白表達(dá)量也隨著時間的變化而上調(diào)，且具有時間依賴性。過表達(dá)Ufm1后，LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的相關(guān)炎性細(xì)胞因子表達(dá)量顯著降低。與對照組相比，Toll樣受體通路中NF-κB P65在LPS刺激后入核增多，但過表達(dá)Ufm1后p65入核減