腎胺酶在輸尿管急性梗阻致急性腎損傷的機制探討.pdf

1、腎胺酶（renalase，RNLS），主要是由腎小管上皮細胞合成和分泌的蛋白質。目前有關腎胺酶的研究主要集中其在心血管、慢性腎功能不全和糖尿病等疾病的作用。其能夠降解循環(huán)中的兒茶酚胺類，降低血壓及心率的作用，此外其還與多種缺血損傷疾病相關，如缺血性腦卒中、急性心肌梗死和缺血性急性腎損傷中，循環(huán)中的腎胺酶水平不足。然而作用機制尚未完全闡明，腎胺酶是通過酶降解的機制降解兒茶酚胺，還是作為細胞因子參與細胞的信號狀態(tài)通路調控。目前，急性腎損傷的

2、高發(fā)病率及不良預后都亟須我們尋找有效的防治手段，在我國結石導致的腎后性急性損傷的發(fā)病率較高。目前RNLS在輸尿管急性梗阻導致的急性腎損傷的作用機制尚未見報道。
　　目的：
　　本實驗研究予RNLS干預，從炎癥反應、氧化應激和細胞凋亡角度觀測其對雙側輸尿管急性梗阻24小時所致的急性損傷的作用。通過觀測腎小管病理損傷情況及炎癥細胞浸潤情況、丙二醛（Maleic Dialdehyde，MDA）、促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-

3、2和TUNEL水平的變化，進一步探討RNLS在雙側輸尿管急性梗阻導致的急性腎損傷的機制及其保護機制。
　　方法：
　　用南方醫(yī)科大學實驗動物中心提供的健康雄性SD大鼠36只，體重在160-200g之間。動物倫理通過廣州醫(yī)科大學動物倫理審查委員會審核批準，實驗在廣州醫(yī)科大學實驗動物中心完成。室溫維持在19℃-24℃，相對濕度為45％～70％，用蛋白質比例為2l％的標準飼料飼養(yǎng)，自由飲水。正式實驗前適應性喂養(yǎng)7天。大鼠隨機分成三

4、組：A組（shame組，n=12只）、B組（BUO24小時+生理鹽水組，n=12只）、C組（BUO24h+RNLS組，n=12只）。采用雙側輸尿管結扎復制急性梗阻性急性腎損傷模型， BUO+RNLS組在造模前腹腔注射人重組RNLS1mg/kg，BUO+vehicle組在造模前予等體積的溶媒生理鹽水腹腔注射。急性梗阻24小時后處死大鼠，檢測血漿肌酐、尿素氮，TBA法檢測血漿丙二醛（MDA）水平，采用光學顯微鏡觀察腎臟組織形態(tài)學改變，免疫組

5、化法檢測大鼠促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，TUNEL檢測腎臟組織細胞凋亡的情況。
　　結果：
　　腎功能：shame組的腎功能沒有改變，雙側輸尿管急性梗阻24小時后， BUO+vehicle組大鼠血清肌酐和尿素氮上升最高，與BUO+RNLS組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。2、血清丙二醛的水平比較：A、B和C三組的MDA水平都有升高，BUO+vehicle組MDA水平最高，其次是BUO+RNLS組，s

6、hame組的水平最低，三組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。3、光鏡觀察腎臟組織的病理學改變：shame組腎臟組織未見異常改變，小球及小管均正常。BUO+vehicle組球囊比例增大，腎小管上皮細胞變性，腎小管擴展，管型形成，間質可見炎癥細胞浸潤。BUO+RNLS組的病理改變較 BUO+vehicle組輕。4、免疫組化及TUNEL檢測：促凋亡蛋白 Bax表達中，BUO+vehicle組的表達最多，其次是BUO+RNLS組，shame組的

7、表達也有少量表達。三組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）?？沟蛲龅鞍譈cl-2的表達中，由高到少分別是BUO+RNLS組、BUO+vehicle組和shame組。三組表達差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。TUNEL檢測結果為BUO+vehicle組的陽性細胞最多，其次是BUO+RNLS組，shame組未見凋亡細胞。三組差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論：
　　1、RNLS可改善腎功能，減輕病理損傷，對急性梗阻致急