基于限制性核酸內切酶放大技術的沙門氏菌檢測生物傳感器.pdf

1、本文詳細介紹了食源性致病菌的危害、常見種類及研究現狀。核酸適配體的功能及其特點和應用。限制性核酸內切酶放大技術的特點及其在生物傳感器檢測中的應用。并對核酸適配體生物傳感器做了相關改進，用于檢測食源性致病菌。
　　1、我們通過適配體的特異性識別和吸附功能設計了簡便、省時、一步檢測鼠傷寒沙門氏菌的熒光生物傳感器。該方案主要基于鏈置換放大-聚合酶延伸對目標物進行靈敏檢測。實驗巧妙設計了一個拱形探針（由aptamer和primer構成）和

2、一個發(fā)夾探針（HP）。發(fā)夾的3’端和5’端分別修飾了熒光基團和猝滅基團。只有當目標物沙門氏鼠傷寒菌存在的條件下，才能夠破壞拱形探針，釋放 primer鏈。被釋放的 primer鏈打開發(fā)夾探針，使猝滅基團和熒光基團遠離，產生熒光。同時在聚合酶的延伸作用下，發(fā)生連置換反應，使primer鏈能夠重復利用，達到信號放大的目的。因為信號放大和熒光強度檢測的本質上的高靈敏性，600 cfu mL-1的致病菌可以在2 h內得到檢測，這樣比之前報道的檢

3、測方法更加的敏感和有效。因此它為發(fā)展鏈置換放大效應基于超靈熒光強度來檢測致病菌的發(fā)展和食品安全分析提供了良好的應用平臺。
　　2、在這項工作中，基于目標物誘導的指數放大反應，我們發(fā)明了一種簡單、迅速、等溫、和超靈敏的均勻比色適配體傳感器來對致病菌進行探測。這種適配體-引物探針包括結合鼠傷寒沙門氏菌的適配體和一段引物序列，這種發(fā)夾探針包括一個引物單元，這個適配體-引物探針被用于識別目標物并且通過基于目標物而激發(fā)指數放大反應（EXPA

4、R）。由于EXPAR耦合DNA酶的放大策略，在目標物致病菌出現的時候，將會在溶液中形成大量大 G-四聯體低聚物，然后在鉀離子和血紅素的輔助下，又折疊成為 G-四聯體/血紅素復合物，這種復合物對于過氧化氫有很強的催化活性，并且產生很強的紫外吸收。這種新穎的EXPAR耦合模仿過氧化酶催化放大技術通過比色法來探測致病菌。在最佳條件下，這種生物傳感器對于致病菌的檢測是非常靈敏的，在4h之內它的檢測限度是80 cfu mL-1.同時，我們的生物傳