矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷對(duì)鉛引起的睪丸間質(zhì)細(xì)胞R2C孕酮合成降低的干預(yù)作用.pdf

1、目的：采用鉛（Pb2+）損傷的睪丸間質(zhì)細(xì)胞R2C細(xì)胞為模型，以矢車(chē)菊素-3-O-葡萄糖苷（Cyanidin-3-O-glucoside，C3G）為營(yíng)養(yǎng)因子，研究C3G對(duì)Pb暴露引起的R2C細(xì)胞孕酮合成下降的干預(yù)作用。
　　方法：通過(guò)放射性免疫技術(shù)（Radioimmunoassay，RIA）檢測(cè)培養(yǎng)液中的孕酮含量以篩選Pb的造模濃度。接著用選定的Pb濃度和一系列C3G濃度作用于細(xì)胞，以CCK8試劑盒測(cè)定細(xì)胞活性，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形

2、態(tài)，以RIA技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)液中的孕酮含量，以化學(xué)發(fā)光法（Chemiluminescence，CL）分析活性氧簇（Reactive Oxygen Species，ROS）水平，以流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry，F(xiàn)CM)分析線粒體膜電位（Mitochondrial Membrane Potential，MMP）降低的細(xì)胞比例，以Western Blot方法分析孕酮合成、PKA-ERK1/2通路，和抗氧化關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平。
　　

3、結(jié)果：以暴露于100μM Pb的R2C細(xì)胞作為損傷模型，12.5,25，50或100μM C3G為營(yíng)養(yǎng)因子，與Pb共同作用于細(xì)胞。Pb作用48h后細(xì)胞活性降低，12.5,25,50μM C3G可使細(xì)胞活性相對(duì)于Pb組上升。Pb作用24h后細(xì)胞活性沒(méi)有顯著變化，但培養(yǎng)液中孕酮含量顯著降低，12.5,25,50μM C3G可使孕酮含量上升。Pb作用24h后膽固醇跨線粒體膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白StAR、孕酮合成關(guān)鍵酶3β-HSD和CYP11A1表達(dá)量下降

4、，類(lèi)固醇激素合成通路PKA蛋白表達(dá)量下降，p-ERK1/2與ERK1/2蛋白表達(dá)量之比下降，25μM C3G可使這些蛋白表達(dá)量或者表達(dá)量之比上調(diào)。Pb作用24h后抗氧化酶SOD2、CAT的表達(dá)量顯著下調(diào)，25、12.5μM C3G均使兩種蛋白表達(dá)量上調(diào)。Pb作用24h后MMP損傷率顯著上升，所有C3G劑量組均使MMP損傷率下降。Pb作用0-160min可使細(xì)胞的ROS水平顯著上升，所有C3G劑量組均可使ROS下降，其中Pb+12.5μM