MicroRNA-125b抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的生長及相關(guān)信號通路的研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學(xué)號：406521213441南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文MicrNA125b抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的生長抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞的生長及相關(guān)信號通路的研究及相關(guān)信號通路的研究TheeffectofmiR125bonmalignantmelanomacellstheresearchontherelativesignalpathway彭麗培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：劉偉教授申請學(xué)位的學(xué)科門類：

2、醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：外科學(xué)論文答辯日期：2016年6月答辯委員會主席：評閱人：2016年6月摘要II摘要背景：背景：黑色素瘤是一種侵襲性極強(qiáng)的惡性腫瘤，在過去30年它是所有類型癌癥中發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤之一。雖然經(jīng)歷了幾十年的研究和藥物開發(fā)，但其治療效果仍不理想，該腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制也尚未完全闡明。目前已知miRNA是一類非編碼小分子RNAs，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)，參與生物復(fù)雜生命過程的調(diào)控，尤其是腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。因此，

3、嘗試通過對黑色素瘤miRNA及其靶基因和相關(guān)信號通路的研究，為黑色素瘤的早期診斷和治療提供新依據(jù)。目的：目的：預(yù)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)miR125b在黑色素瘤中低表達(dá)，靶基因是MLK3。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建miR125b過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)黑色素瘤細(xì)胞系，觀察過表達(dá)miR125b對細(xì)胞增殖、凋亡和周期的影響，確定miR125b在黑色素瘤中的抑癌作用，并進(jìn)一步探索與miR125b發(fā)揮抑瘤作用相關(guān)的可能信號通路。闡明miR125b在黑色素瘤中發(fā)揮抑癌基因作用的分子機(jī)

4、制，為后期臨床治療提供依據(jù)。方法：方法：構(gòu)建micrNA125b過表達(dá)慢病毒，轉(zhuǎn)染原發(fā)性黑色素瘤細(xì)胞A375和侵襲性黑色素瘤胞SKMEL5，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。轉(zhuǎn)染目的病毒的為實(shí)驗(yàn)組A375125bup、SK125bup，轉(zhuǎn)染空載病毒的為陰性對照組A375negative、SKnegative，未轉(zhuǎn)染病毒的為空白組A375、SKMEL5。采用RTPCR法檢測各組細(xì)胞miR125b的表達(dá)水平，MTT法檢測細(xì)胞的增殖情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞

5、的凋亡和細(xì)胞周期。WesternBlot檢測靶蛋白MLK3的表達(dá)水平，及各通路上關(guān)鍵蛋白(pCjun、Cjun、ERK12、MEK2、pAKT、AKT1)的表達(dá)水平。結(jié)果：結(jié)果：1.RTPCR結(jié)果顯示：miR125b在實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中的表達(dá)量較空白組、陰性對照組的表達(dá)量明顯增多（P0.05）。2.MTT結(jié)果顯示：A375125bup細(xì)胞與A375negative細(xì)胞、空白組細(xì)胞相比增殖活性明顯降低(P＜0.05)，而A375negative