系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病相關(guān)的I型干擾素通路調(diào)控分子的篩選和功能研究.pdf

1、目的：I型干擾素通路的異?；罨c統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)病過程密切相關(guān)，本研究旨在篩選I型干擾素通路的新型調(diào)控分子，并深入研究其在I型干擾素通路以及疾病發(fā)生發(fā)展中的作用，為開發(fā)新的精準(zhǔn)治療靶點(diǎn)提供線索。
　　方法：
　　1.通過雙熒光報(bào)告系統(tǒng)和小干擾RNA庫(kù)高通量篩選干擾素通路的候選調(diào)控分子。
　　2.通過體外轉(zhuǎn)染不同單條小干擾RNA，驗(yàn)證篩選結(jié)果。
　　3．通過對(duì)狼瘡病人和正常人外周血基因芯片表達(dá)譜的對(duì)比分析，結(jié)合高通

2、量篩選的結(jié)果，挑選候選基因。
　　4.在不同的細(xì)胞中過表達(dá)和敲減候選基因細(xì)胞周期依賴激酶1（CDK1）后，通過定量PCR檢測(cè)其對(duì)下游干擾素誘導(dǎo)基因mRNA水平的影響，通過Western Blot檢測(cè)CDK1對(duì)I型干擾素通路中關(guān)鍵信號(hào)分子的影響。
　　5.為了進(jìn)一步明確CDK1與系統(tǒng)性紅斑狼瘡異常活化的I型干擾素通路有關(guān)，使用狼瘡病人外周血、腎臟和皮膚的基因芯片表達(dá)譜分析CDK1的表達(dá)和干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)水平的相關(guān)性，以及C

3、DK1的表達(dá)水平和疾病活動(dòng)性的相關(guān)性。
　　6.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)使用CDK1抑制劑初步檢測(cè)其作為藥物靶標(biāo)的可能性。
　　結(jié)果：
　　1.高通量篩選出的干擾素通路候選調(diào)控分子具有較好的重復(fù)性，可以在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中較好的重復(fù)。
　　2. CDK1在病人中差異表達(dá)，且在篩選實(shí)驗(yàn)中變化幅度較大的候選分子。
　　3.CDK1在不同的細(xì)胞系和原代細(xì)胞中都可以促進(jìn)干擾素誘導(dǎo)基因mRNA表達(dá)水平。
　　4.CDK1通過影響I

4、型干擾素信號(hào)通路中的關(guān)鍵信號(hào)分子的磷酸化水平發(fā)揮作用。
　　5. CDK1在狼瘡病人的外周血和腎臟組織樣本中的表達(dá)水平相對(duì)正常人樣本都上調(diào)，且其表達(dá)水平與疾病活動(dòng)性相關(guān)，與干擾素積分相關(guān)，與患者用藥物無相關(guān)性。
　　6. CDK1的抑制劑可以在體外實(shí)驗(yàn)中下調(diào)狼瘡病人外周血單個(gè)核細(xì)胞的干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)水平；也可以下調(diào)干擾素加速狼瘡鼠模型中腎臟組織細(xì)胞中干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)水平。
　　結(jié)論：CDK1促進(jìn)I型干擾素通路的