屈曲花種子總黃酮提取、純化工藝以及抗氧化性能的研究.pdf

1、黃酮類化合物廣泛分布在植物種子、葉、果實(shí)中，具有抗氧化、抗衰老、抗癌等多種生物學(xué)活性，因而備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。目前，關(guān)于屈曲花種子提取黃酮類化合物的研究較少，且屈曲花的研究主要集中在國(guó)外，國(guó)內(nèi)鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以廣州田野風(fēng)公司的屈曲花種子為原料，以總黃酮為考察指標(biāo)，對(duì)屈曲花種子總黃酮的提取、純化、抗氧化活性等進(jìn)行了系統(tǒng)研究。研究結(jié)果為屈曲花種子工業(yè)化應(yīng)用提供了參考標(biāo)準(zhǔn)，也為廣泛開發(fā)利用屈曲花藥物資源提供了良好的參考價(jià)值。本研究的主要內(nèi)容

2、與結(jié)果如下：
　?。?）利用超聲波輔助提取法對(duì)屈曲花種子總黃酮進(jìn)行提取，通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)和響應(yīng)面法共同對(duì)提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，得到粗提物。固定粉碎粒度為60目，最優(yōu)條件為：乙醇濃度83％、超聲時(shí)間11min、料液比62( mL/g)，超聲功率96 W。此條件下，黃酮得率為2.568±0.05%。其中，乙醇濃度對(duì)屈曲花種子總黃酮得率的影響最大，其次依次為提取時(shí)間、料液比、超聲波功率。
　?。?）通過6種大孔樹脂對(duì)屈曲花種子總黃

3、酮粗提物的靜態(tài)吸附解吸性能的比較，篩選出了最優(yōu)樹脂X-5。通過大孔樹脂X-5的靜態(tài)試驗(yàn)和動(dòng)態(tài)試驗(yàn)確定了純化屈曲花種子總黃酮的最佳工藝參數(shù)：上樣濃度1.569 mg/mL，上樣量30 mL、上樣流速1.5 mL/min、原液上樣、乙醇洗脫濃度70%、洗脫量100 mL、洗脫流速1.0 mL/min。在此工藝條件下，所得總黃酮純度為74.59%，較純化前9.18%提高了8倍。進(jìn)一步通過顯色反應(yīng)結(jié)合紫外光譜特征鑒別精提物總黃酮類型，初步確定了

4、含黃酮類和黃酮醇（3-OH取代）物質(zhì)。
　?。?）考察屈曲花種子總黃酮的體外自由基清除能力和IPEC-J2細(xì)胞損傷測(cè)定實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明屈曲花種子總黃酮能夠很好地清除DPPH·自由基。通過還原力實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)精提物濃度大于0.4 mg/mL時(shí)，還原力比相同濃度的BHT大，說明屈曲花種子總黃酮具有較好的抗氧化活性能力。在IPEC-J2細(xì)胞損傷模型實(shí)驗(yàn)中，通過觀察比較細(xì)胞存活率及其ROS熒光結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在12.5-50μg/mL濃度范圍內(nèi)，精