鈣敏感受體與鈣振蕩的維持及其調(diào)控的轉(zhuǎn)錄激活.pdf

1、目的：
　　研究鈣敏感受體（calcium-sensing receptor，CaSR）在組胺或H2O2誘導(dǎo)的鈣振蕩中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）原代培養(yǎng)；細(xì)胞轉(zhuǎn)染；鈣離子熒光探針Fura-2/AM和熒光成像系統(tǒng)檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度；酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測NF-kB的轉(zhuǎn)錄活性；RT-PCR檢測炎癥細(xì)胞因子I

2、L-8的基因表達(dá)；Western Blot檢測CaSR聚合；GFP-PHD標(biāo)記HUVECs，激光共聚焦系統(tǒng)檢測細(xì)胞內(nèi)三磷酸肌醇（InsP3）的變化。
　　結(jié)果：
　　1、組胺刺激HUVECs產(chǎn)生鈣振蕩，用shRNA干擾技術(shù)下調(diào)CaSR表達(dá)后組胺誘導(dǎo)的鈣振蕩的持續(xù)時(shí)間縮短，同樣，Calhex231（CaSR負(fù)性變構(gòu)調(diào)節(jié)劑）也能縮短組胺誘導(dǎo)的鈣振蕩的持續(xù)時(shí)間。
　　2、H2O2刺激HUVECs產(chǎn)生鈣振蕩，CaSR表達(dá)下調(diào)及

3、Calhex231均能縮短H2O2誘導(dǎo)的鈣振蕩的持續(xù)時(shí)間。
　　3、組胺或H2O2促進(jìn)HUVECs NF-kB的轉(zhuǎn)錄激活，而CaSR表達(dá)下調(diào)及Calhex231通過縮短鈣振蕩的持續(xù)時(shí)間下調(diào)組胺或H2O2誘導(dǎo)的NF-kB的轉(zhuǎn)錄激活。
　　4、組胺或H2O2促進(jìn)HUVECs IL-8的基因表達(dá)，而CaSR表達(dá)下調(diào)及Calhex231通過縮短鈣振蕩的持續(xù)時(shí)間抑制組胺或H2O2上調(diào)的IL-8的基因表達(dá)。
　　5、組胺或H2O2