枸杞多糖通過(guò)PPARγ調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞功能的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　近年來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展及生活方式的改變，肥胖的發(fā)生率在全球范圍內(nèi)迅速增加，尤其我國(guó)肥胖率在2014年已高達(dá)11％。肥胖屬于一種代謝綜合征，往往引起2型糖尿病、心血管疾病、非酒精性脂肪肝及高血壓等的發(fā)生，嚴(yán)重威脅人類的健康。越來(lái)越多的學(xué)者關(guān)注肥胖形成的機(jī)制研究，發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（peroxisome proliferator activated receptorsγ,PPARγ）在肥胖的發(fā)生與發(fā)展中起著關(guān)鍵

2、性作用。已證實(shí)PPARγ屬于配體激活的核受體轉(zhuǎn)錄因子，在脂肪生成、脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，并且在能量代謝調(diào)節(jié)中扮演著重要的角色。我們課題組前期通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides,LBP）可以明顯減小高脂喂養(yǎng)小鼠模型中脂肪細(xì)胞的大小。因此，我們提出假設(shè)，LBP是否通過(guò)PPARγ改善高脂誘導(dǎo)的肥胖及其可能的分子作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.釆用高脂飼料喂養(yǎng)C57BL/6

3、小鼠建立體內(nèi)肥胖模型，選取40只雄性C57BL/6小鼠（周齡：6-8周；體重：18-20克），隨機(jī)分為4組：普食組、高脂組、100mg/kg LBP+高脂組及200mg/kg LBP+高脂組。每周監(jiān)測(cè)體重、飲食及飲水量，持續(xù)喂養(yǎng)24周，禁食8小時(shí)，收集血清及腹部白色脂肪組織，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）等方法檢測(cè)肥胖相關(guān)的生理生化指標(biāo)。
　　2.采用棕櫚酸（palmitic acid,PA

4、）孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞建立體外肥胖模型。首先，將3T3-L1前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，采用100μg/mL,300μg/mL，600μg/mL，900μg/mL LBP孵育成熟的脂肪細(xì)胞24小時(shí)，蛋白免疫印跡（western blot）技術(shù)分析磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3kinase,PI3K）、磷酸化PI3K（P-PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B

5、,PKB/AKT）、磷酸化AKT（P-AKT）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、磷酸化JNK（P-JNK）、PPARγ及磷酸化PPARγ（P-PPARγ）的表達(dá)水平。
　　3.肥胖脂肪細(xì)胞模型中，采用10μM PI3K/AKT信號(hào)通路抑制劑-LY294002孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞1小時(shí)；采用20μM JNK信號(hào)通路抑制劑-SP600125孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞1小時(shí)

6、；采用10μM PPARγ激動(dòng)劑-羅格列酮（rosiglitazone）孵育成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞12小時(shí)，收集細(xì)胞全蛋白，western blot檢測(cè)P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-PPARγ/PPARγ的表達(dá)水平。采用AKT或JNK小分子干擾RNA（small interfering RNA,siRNA）轉(zhuǎn)染成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞24小時(shí)，western blot檢測(cè)P-AKT/AKT、P-JNK/JNK、P-P

7、PARγ/PPARγ的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.C57BL/6小鼠及3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型經(jīng)LBP干預(yù)后，各項(xiàng)肥胖指標(biāo)均顯著下降。
　　2.3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型中，P-PPARγ和P-AKT含量降低，P-JNK含量增加。經(jīng)LBP干預(yù)后，P-PPARγ和P-AKT含量增加，P-JNK含量降低。
　　3.3T3-L1脂肪細(xì)胞的肥胖模型加入PI3K/AKT抑制劑LY294002或轉(zhuǎn)染AKT si