加味龜鹿二仙湯對原發(fā)性卵巢功能不全模型小鼠的干預(yù)作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　采用環(huán)境化學(xué)物質(zhì)4-乙烯基環(huán)己烯雙環(huán)氧化物（4-vinylcyclohexene diepoxide，VCD）構(gòu)建原發(fā)性卵巢功能不全（primary ovarian insufficiency，POI）小鼠模型，觀察加味龜鹿二仙湯對POI模型小鼠動情周期、血清抗苗勒氏管激素（anti-Mullerian hormone，AMH）、卵巢組織形態(tài)學(xué)及miR-190表達的影響，探討加味龜鹿二仙湯對POI的干預(yù)作用及機制，為臨

2、床上中藥治療POI提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將連續(xù)兩個動情周期正常的40只昆明雌性小鼠納入實驗，隨機分為空白組、模型組、DHEA組、中藥組。對模型組、DHEA組、中藥組連續(xù)15天腹腔注射環(huán)境化學(xué)物質(zhì)VCD構(gòu)建POI模型。其后中藥組給予加味龜鹿二仙湯中藥藥液0.3ml灌胃，DHEA組給予DHEA藥液0.3ml灌胃，而空白組和模型組均給予生理鹽水0.3ml灌胃。4天為一療程，每4天停1天，共30天。灌胃處理完成后采用酶聯(lián)免

3、疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測各組小鼠血清AMH水平，并光鏡下觀察各組小鼠動情周期和卵巢組織形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用實時熒光定量PCR（quantitative Real-time PCR，qRT-PCR）技術(shù)檢測各組小鼠卵巢組織中miR-190表達水平。
　　結(jié)果：
　　1．小鼠動情周期改變：空白組小鼠陰道脫落細胞涂片均有規(guī)律的動情周期；其余三組經(jīng)腹腔注射VCD后

4、均有動情周期紊亂，且以動情間期為主。DHEA組和中藥組經(jīng)藥物干預(yù)治療后，小鼠紊亂的動情周期稍有改善，表現(xiàn)為動情周期延長，動情間期延長。
　　2．小鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)改變：模型組小鼠鏡下見卵巢明顯萎縮，皮質(zhì)增厚，可見較多閉鎖卵泡，原始卵泡及各級發(fā)育中的卵泡消失或偶見。DHEA組和中藥組鏡下見小鼠卵巢原始卵泡及初級卵泡稍增多，閉鎖卵泡減少。
　　3．模型組小鼠血清AMH含量低于空白組，但差異并不顯著；與模型組相比，DHEA組和中藥

5、組小鼠血清AMH含量均有上升趨勢，但差異并不明顯。
　　4．模型組小鼠卵巢miR-190表達明顯高于空白組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與模型組相比，DHEA組和中藥組小鼠卵巢miR-190表達量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；中藥組小鼠卵巢miR-190表達低于DHEA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），與空白組相比，中藥組小鼠卵巢miR-190表達量稍升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)