著床窗口期小鼠子宮組織中長鏈非編碼RNA的鑒定及其功能研究.pdf

1、胚胎的成功植入依賴于容受性子宮與活性囊胚之間復雜的分子對話，子宮容受性的建立是哺乳動物胚胎成功植入的關鍵步驟。子宮內膜僅在一段十分短暫的時間內具有接受活性囊胚的能力，這一時期叫做“著床窗口期”。盡管體外受精和胚胎移植技術在生產實踐中已被廣泛應用，但是妊娠率依然不理想，子宮內膜容受性破壞被認為是輔助生殖技術失敗的主要原因之一。既往的研究充分顯示了蛋白編碼基因和miRNAs在子宮內膜容受性建立、胚胎植入以及后繼蛻膜化過程中所發(fā)揮的重要作用。

2、長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)作為非編碼RNA家族中數(shù)量最多的一員，在卵母細胞成熟和早期胚胎發(fā)育過程中的功能已有深入研究，但在胚胎著床過程中的作用鮮有報道。本試驗收集妊娠小鼠第4天、第5天著床位點和非著床位點子宮樣本進行深度測序，以期獲得小鼠著床窗口期子宮中的lncRNAs圖譜，為今后深入研究lncRNAs在子宮內膜容受性建立以及后繼蛻膜化過程中的作用及機制奠定基礎。本試驗得到的主要結果如下:<

3、br>　　1通過Illumina HiSeqTM2500高通量測序平臺獲得了小鼠著床窗口期子宮組織中的lncRNAs圖譜，共得到lncRNA有7764個，其中已知lncRNA6179個，新預測lncRNA1585個。我們從中挑選了13個差異表達的lncRNAs并對其進行了qRT-PCR驗證，與測序結果相吻合。
　　2進一步對所獲得的lncRNAs的表達水平、序列和位點保守性進行分析，預測lncRNA的cis和trans作用靶基因;

4、將獲得的74個差異表達lncRNAs靶基因進行了GO和KEGG富集分析，發(fā)現(xiàn)在植入窗口期差異表達的lncRNAs主要參與組織重塑、免疫反應和代謝相關過程，對胚胎著床過程中的多種信號通路具有調控作用。
　　3在測序結果中，我們發(fā)現(xiàn)一個在小鼠妊娠第4天子宮中顯著上調，在第5天著床位點和非著床位點差異表達的已知lncRNA GAS5。進一步通過構建小鼠早期妊娠、延遲著床與激活、類固醇激素處理模型，揭示GAS5在著床窗口期子宮中呈現(xiàn)動態(tài)表

5、達模式，GAS5在妊娠子宮中的表達受活性胚胎和孕酮的調節(jié)，預示著GAS5可能在子宮內膜容受性的建立以及胚胎植入過程中發(fā)揮作用。
　　4 FISH的結果表明，GAS5定位于小鼠子宮內膜基質細胞的細胞核。人工誘導蛻膜化子宮中GAS5的表達顯著上調，隨體外誘導蛻膜化時間的增加GAS5表達下降，預示著GAS5可能在蛻膜化過程發(fā)揮一定的功能。
　　綜上所述，本研究建立了小鼠著床窗口期lncRNAs圖譜，篩選出著床窗口期差異表達的lnc