Clusterin和CR1蛋白在腦淀粉樣血管病中的表達(dá)及其在治療中的作用.pdf

1、第一部分：Clusterin蛋白對(duì)腦淀粉樣血管病治療的作用
　　研究目的：調(diào)節(jié)腦內(nèi)Clusterin蛋白的表達(dá)，觀察是否能減少P淀粉樣蛋白（P-amyloid protein，A P)聚集體的沉積，改善腦淀粉樣血管病(Cerebral amyloid angiopathy，C A A)。
　　研究方法：用人工合成Clusterin活性肽鏈113-122片段，通過(guò)微泵持續(xù)滴注（2周）至APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠（Tg6799)的

2、側(cè)腦室后，采用水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試小鼠的行為學(xué)改變，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)檢測(cè)APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)AP40和AP42的水平，通過(guò)免疫組化觀察APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的C A A的表達(dá)變化，通過(guò)Western-Blot檢測(cè)低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2(Low density lipoprotein receptor related protein，L R P

3、2)的變化，探索 Clusterin活性肽鏈治療CAA的作用及其可能機(jī)制。
　　研究結(jié)果：注射人工合成Clusterin活性肽鏈113-122片段后的APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)較對(duì)照組有明顯改善，AP40和AP42水平也顯著減少，免疫組化顯示C A A的嚴(yán)重程度也有顯著改善。此外，注射人工合成Clusterin活性肽鏈113-122片段后，免疫印跡法（Western-Bolt)顯示APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的L R

4、P2蛋白表達(dá)顯著增加，提示Clusterin活性肽鏈可能通過(guò)L R P2受體起到治療C A A的作用。
　　研究結(jié)論：腦室持續(xù)滴注Clusterin活性肽鏈可以減少APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的AP40和A P42的沉積，從而改善APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的C A A的血管病變和記憶障礙，而L R P2受體可能參與了 Clusterin活性肽鏈的作用。這些研宄結(jié)果為治療C A A提供了重要依據(jù)。
　　第二部分： I型補(bǔ)體受體（CR

5、1)蛋白在腦淀粉樣血管病中的表達(dá)
　　研究目的：觀察 I型補(bǔ)體受體(Complement receptor，CR)蛋白在腦淀粉樣血管病中的表達(dá)。
　　研究方法：以APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠（Tg6799)為動(dòng)物模型，取小鼠海馬及腦葉組織，分別用western-bolt和E L I S A兩種方法腦組織中的C R1蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)，觀察CR1的表達(dá)變化。此外，用多聚甲醛腦灌注固定腦組織后，用免疫熒光進(jìn)行CR1和血管內(nèi)皮標(biāo)記物（C

6、D31)、A P共定位，觀察C R1蛋白在血管中的表達(dá)變換，及其與AP的定位關(guān)系。
　　研究結(jié)果：Western-bolt和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（E L I S A)顯示C R1蛋白在APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的表達(dá)明顯高于正常小鼠。以血管內(nèi)皮標(biāo)記物（CD31)為標(biāo)記，免疫熒光顯示C R1蛋白在APP-PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的血管中表達(dá)呈顆?；驁F(tuán)塊狀。以A P為標(biāo)記，檢測(cè)CR1蛋白在CAA內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)。
　　研究結(jié)論：CR1可能在腦