Trolox在肌萎縮側(cè)索硬化癥中的神經(jīng)保護作用及氧化應激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與自噬的相關研究.pdf

1、 2A dissertation submitted to Zhengzhou University for the degree of Doctor The Neuroprotection of Trolox in the Organotypic Slice Cultues of ALS and the Mechanisms of Oxidative Stress, ER Stress and Autophag

2、y By : Peiqi Lu Supervisor: Prof. Jiyu Lou Neurology The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University May, 2015 4脊髓薄片培養(yǎng)。對薄片進行氧化應激損傷后，在鏡下觀察不同程度的損傷對野生型和突變型小鼠的運動神經(jīng)元形態(tài)和數(shù)目有何變化。這里采用胎鼠運動神經(jīng)元的培養(yǎng)方法進行細胞培養(yǎng)，造成氧化損傷后，檢測運動神經(jīng)元內(nèi)活性氧簇

3、的含量；其細胞毒性通過檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶（LDH）釋放量來反映。 結(jié)果：實驗提示 Trolox 在一定程度上保護原代培養(yǎng)的運動神經(jīng)元免受過氧化氫造成的氧化應激損傷。突變型給予運動神經(jīng)元 Trolox 處理后，顯著地減少了胞內(nèi)活性氧簇的產(chǎn)生。 然而，對于野生型的運動神經(jīng)元，Trolox 并未表現(xiàn)出明顯的抗氧化作用。 結(jié)論： 在培養(yǎng)的 SOD1 突變型小鼠脊髓運動神經(jīng)元中， Trolox 顯著的降低了ROS 水平，降低了氧化應激帶來的損

4、傷，提示具有保護作用。 第二部分 肌萎縮側(cè)索硬化中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應伴隨著 NF-κB 的活化 目的：本研究目的是探討肌萎縮側(cè)索硬化中可能的機制之一——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應及其通路。 方法：為了檢測野生型和突變型中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應和 NF-κB 是否參與了發(fā)病過程，給予內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導劑后分別對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關蛋白和 NF-κB 進行免疫印跡檢測，并對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路中的關鍵分子進行檢測，來探討可能的通路。用免疫熒光直觀的觀察外源性蛋白的分布特點。 結(jié)果

5、：肌萎縮側(cè)索硬化時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應參與了發(fā)病過程，同時檢測到NF-κB 的活化。 第三部分 肌萎縮側(cè)索硬化中 SOD1 突變型小鼠模型培養(yǎng)中海藻糖對自噬的活化和神經(jīng)保護作用 目的：本研究中，我們采用海藻糖誘導 ALS 動物模型中自噬的高表達，觀察海藻糖對各種造成 ALS 蛋白質(zhì)沉積的毒性蛋白的作用。 方法：對 ALS 小鼠脊髓進行切片及固定，采用不同濃度的海藻糖誘導自噬的發(fā)生。用免疫印跡法檢測 LC3-Ⅱ這種經(jīng)典的自噬標志物，以及另一種