IL-17A通過(guò)EphrinB2信號(hào)通路抑制小鼠心臟成纖維細(xì)胞的激活.pdf

1、目的：
　　心肌纖維化是心室重塑的重要病理基礎(chǔ)，IL-17A參與心肌纖維化，但機(jī)制尚未闡明，EphrinB2信號(hào)通路參與腎臟的纖維化，但其是否在心肌纖維化中起作用還未見報(bào)道。我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL-17A可以降低心臟成纖維細(xì)胞EphrinB2的表達(dá)，因此，本研究旨在觀察IL-17A是否通過(guò)EphrinB2信號(hào)通路參與了心臟成纖維細(xì)胞的激活。
　　方法：
　　應(yīng)用酶消化及差速貼壁法分離培養(yǎng)新生小鼠原代心臟成纖維細(xì)胞，并應(yīng)用

2、vimentin、CD31、troponin T、SM myosin抗體進(jìn)行免疫熒光染色鑒定培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞。免疫熒光法用于檢測(cè)心臟成纖維細(xì)胞EphrinB2的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、慢病毒陰性組、慢病毒感染組，IL-17A組，慢病毒陰性對(duì)照+IL-17A組、慢病毒感染組+IL-17A組。用CCK8及劃痕試驗(yàn)檢測(cè)小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖及遷移能力，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)及Western blot檢測(cè)α-SMA

3、、Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)情況。各組實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（(x)±SE）表示，兩組樣本平均數(shù)比較時(shí)用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較采用ANOVA(方差分析)，應(yīng)用SPSS19.0作統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　體外分離培養(yǎng)的小鼠心臟成纖維細(xì)胞經(jīng)免疫熒光染色vimentin(+)、CD31(-)、troponin T（-）、SM myosin(-)，純度在95％以上，且小鼠心臟成纖維細(xì)胞

4、大量表達(dá)EphrinB2; IL-17A（100ng/ml）處理24h后，小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、α-SMA的表達(dá)和Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均較對(duì)照組顯著降低。與此同時(shí)，EphrirB2表達(dá)也較對(duì)照組明顯下降;慢病毒感染沉默EphrinB2基因后，心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、α-SMA表達(dá)及膠原合成均較對(duì)照組顯著降低，而EphrinB2基因過(guò)表達(dá)后結(jié)果則相反。EphrinB2基因沉默的心臟成纖維細(xì)胞IL-17A處理組即efnb2-

5、shRNA+IL-17A與對(duì)照組即scramble+IL-17A組、control+IL-17A組相比，小鼠心臟成纖維細(xì)胞的增殖遷移能力、α-SMA的表達(dá)及Ⅰ、Ⅲ型膠原的合成均進(jìn)一步降低。而EphrinB2過(guò)表達(dá)的心臟成纖維細(xì)胞IL-17A處理組即lenti-efnb2+IL-17A與對(duì)照組vector+IL-17A、control+IL-17A相比，逆轉(zhuǎn)了IL-17A對(duì)小鼠心臟成纖維細(xì)胞的抑制作用。
　　結(jié)論：
　　IL-