缺氧誘導(dǎo)因子1α與CXCL12-CXCR7生物軸在口腔鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移中的協(xié)同作用研究.pdf

1、目的：通過研究觀察趨化因子受體7（CXCR7）在口腔鱗癌中的表達(dá)，探討其與趨化因子12（CXCL12）所組成的生物軸對口腔鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，并探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）對該生物軸的調(diào)控作用。
　　方法：1、Western blot法檢測不同濃度CXCL12作用下CXCR7在Tca-8113中的表達(dá)。2、選擇表達(dá)CXCR7最高的CXCL12濃度進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)分組:低氧組+CXCL12組[H（C+)]、常氧+C

2、XCL12組[N（C+）]、低氧CXCL12（-）組[H(C-)]和常氧CXCL12（-）組[N(C-)]，采用Transwell侵襲法、粘附試驗(yàn)、劃痕試驗(yàn)，觀察四種培養(yǎng)條件下，缺氧和CXCL12對CXCR7的表達(dá)影響和Tca-8113細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。3、Western blot法和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測HIF-1α、CXCR7及生物軸下游靶基因MMP-9蛋白表達(dá)。并探討CXCR7和HIF-1α的表達(dá)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1

3、、檢測常氧條件下CXCR7表達(dá)最高的CXCL12濃度：常氧培養(yǎng)Tca-8113細(xì)胞，按照0、20、30、40、50、60、80ng/ml濃度的細(xì)胞因子稀釋液3ml/瓶加入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行CXCR7蛋白表達(dá)的篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CXCR7在50ng/ml時(shí)蛋白表達(dá)是最高的。2、Tca-8113細(xì)胞H（C+）、N（C+）、H(C-)、N(C-)四組的粘附能力：H（C+）組細(xì)胞A595值分別為（0.76±0.08）明顯高于N(C-)組（0.21±0.0

4、3），N（C+）組（0.49±0.05）高于N(C-)組（0.21±0.03），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。3、Tca-8113細(xì)胞H（C+）、N（C+）、H(C-)、N(C-)四組24h，36h的遷移率H（C+）組為（0.532±0.268）％、（0.722±0.314）％，明顯高于N(C-)組（0.404±0.684）％、（0.644±0.415）％。N（C+）組（0.483±0.513）％、（0.699±0.059）％高于N

5、(C-)組（0.404±0.684）％、（0.644±0.415）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。4、Tca-8113細(xì)胞H（C+）、N（C+）、H(C-)、N(C-)四組的侵襲能力：H（C+）組穿膜細(xì)胞數(shù)為（145±16.7）個(gè)，明顯高于N(C-)組（91.2±4.55）。N（C+）組穿膜細(xì)胞數(shù)為（113±6.04），高于N(C-)組（91.2±4.55），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。5、Western blot法檢測H（

6、C+）、N（C+）、H(C-)、N(C-)組CXCR7、HIF-1α及MMP9蛋白的變化，結(jié)果顯示H（C+）組的CXCR7、HIF-1α及MMP-9表達(dá)最高。N（C+）組的CXCR7、及MMP-9表達(dá)明顯高于N(C-)組。6、免疫細(xì)胞化學(xué)S-P法觀察H（C+）、N（C+）、H(C-)、N(C-)的CXCR7、HIF-1α及MMP9表達(dá)變化，結(jié)果顯示H（C+）組的CXCR7、HIF-1α及MMP9表達(dá)最高，N（C+）組的CXCR7、及MM